蛋白质的分离纯化与结构精选.pptx

第五节 蛋白质的分离纯化与结构分析 The Separation and Purification and Structure Analysis of Protein 一、蛋白质的提取 1. 材料的选择 2. 组织细胞的粉碎 3. 蛋白质的提取 微生物、植物和动物都可做为制备蛋白质的原材料，所选用的材料主要依据实验目的来确定。 对于微生物，应注意它的生长期，在微生物的对数生长期，酶和核酸的含量较高，可以获得高产量 1. 材料的选择 2. 组织细胞的粉碎 1. 高速组织捣碎： 2. 玻璃匀浆器匀浆： 3. 超声波处理法：此法多适用于微生物材料，用大肠杆菌制备各种酶，常选用50-100毫克菌体/毫升浓度，在1KG至10KG频率下处理10-15分钟，此法的缺点是在处理过程会产生大量的热，应采取相应降温措施。对超声波敏感和核酸应慎用。 4. 反复冻融法：将细胞在-20度以下冰冻，室温融解，反复几次，由于细胞内冰粒形成和剩余细胞液的盐浓度增高引起溶胀，使细胞结构破碎。 5. 化学处理法：有些动物细胞，例如肿瘤细胞可采用十二烷基磺酸钠（SDS）、去氧胆酸钠等细胞膜破坏，细菌细胞壁较厚，可采用溶菌酶处理效果更好。 超声波细胞破碎仪 3. 蛋白质的分离纯化 一、蛋白质（包括酶）的提取 大部分蛋白质都可溶于水、稀盐、稀酸或碱溶液 少数与脂类结合的蛋白质则溶于乙醇、丙酮、丁醇等有机溶剂中