培养基配制及灭.docVIP

广东食品药品职业学院实训教学教案 （2010～2011学年第一学期） 课程名称 实训项目 培养基的配制与灭菌技术 课时 2 教学对象 12月3日 教 材 教学方法 1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。 2、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。 4、了解高压蒸气灭菌的原理与方法教学与要求 培养基的2、熟悉玻璃器皿的包扎方法 3、了解高压蒸气灭菌的原理 重点难点 培养基的天平、称量纸、匙、pH试纸、量筒、试管、、玻璃棒、烧杯、试管架、铁丝筐、棉花、线绳、报纸、灭菌锅。蛋白胨、牛肉膏、、琼脂、1mol/LNaOH溶液、1mol/LHCl溶液。1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制的基本程序。 2、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。 3、熟悉玻璃器皿的包扎方法。 4、了解高压蒸气灭菌的原理与方法适宜的pH值合适的 按物理状态：液体培养基、固体培养基和半固体培养基。 （二）高压蒸气灭菌 利用加热一个密闭的加压灭菌锅，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸气。由于蒸气不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。 一般培养基用0.1Mpa，121.515～30min →溶解→调pH值→→过滤→ 分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板1.称量药品根据培养基配方依次准确称取各种药品，放入适当大小的烧杯中，琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速。 2.溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入烧杯中，小火加热，并用玻棒搅拌，以防液体溢出。待各种药品完全溶解后，停止加热，补足水分。3.调节pH 根据培养基对pH的要求，用1mol/L NaOH或1mol/L HC1溶液调至所需pH。测定pH可用pH试纸溶化琼脂 固体培养基须加入一定量琼脂。琼脂加入后，置一面搅拌一面加热，直至琼脂完全融化后才能停止搅拌，并补足水分(水需预热)。注意控制火力不要使培养基溢出或烧焦。 过滤分装 先将过滤装置安装好。如果是液体培养基，玻璃漏斗中放一层滤纸，如果是固体或半固体培养基，则需在漏斗中放多层纱布，或两层纱布夹一层薄薄的脱脂棉趁热进行过滤。过滤后立即进行分装。分装时注意不要使培养基沾染在管口或瓶口，以免浸湿棉塞， 引起污染。液体分装高度以试管高度的1/4左右为宜。固体分装装量为管高的1/5，半固体分装试管一般以试管高度的1/3为宜；分装三角瓶，其装量以不超过三角瓶容积的一半为宜。包扎标记 培养基分装后加好棉塞，再包上一层防潮纸，用棉绳系好。在包装纸上标明培养基名称，制备组别和日期等。1、营养肉汤培养基（培养细菌）每组配制50ml， 直接称取营养肉汤培养基 18 g 水1000ml 1）计算与称量：根据需求计算各成分的量，并准确称量 2）配制：直接称取营养肉汤培养基 0.9g,，加热溶解于0ml?蒸馏水中调节pH值至7.0～7.2。分装，加棉塞?121℃高压灭菌?15备用。2、营养肉汤琼脂培养基（细菌的分离培养，观察菌落） 每组配制180ml 牛肉3g(0.6g) 蛋白胨10g(1.8g) NaCl 5g(0.9g) 琼脂 15～20g1000ml (180ml) 1）计算与称量：根据需求计算各成分的量，并准确称量 2）配制：将除琼脂以外的各成分溶解于蒸馏水内，，校正pH至7.2～7.4。加入琼脂，加热煮沸，使琼脂溶化。加棉塞?121℃高压灭菌15min。　　 1、玻璃仪器的清洗：培养皿6套，1ml吸量管2支、涂布棒2支 2、玻璃仪器的包扎：培养皿6套包成一包、1ml吸量管2支、涂布棒2支。 （四）培养基和玻璃器材的灭菌 高压蒸气灭菌（因实训室条件有限，高压蒸气灭菌无法由学生完成，高压灭菌锅的使用在课堂讲解） 1、加水 打开灭菌锅盖，向锅内加水到水位线。立式消毒锅最好用已煮开过的水，以便减少水垢在锅内的积存。注意水要加够，防止灭菌过程中干锅。 2、装料、加盖 灭菌材料放好后，将灭菌盖上的软管插入灭菌桶的槽内，关闭灭菌器盖，使蒸汽锅密闭，勿使漏气。 3、加热排气及升温灭菌打开放汽阀，加热，自锅内开始产生蒸汽后3min再放汽阀（或喷出气体不形成水雾），此时蒸汽已将锅内的冷空气由排气孔排尽，温度随蒸汽压力增高而上升，待压力逐渐上升至所需温度时，控制热源，维持所需压力和温度，并开始计时，一般培养基控制在0.1MPa灭菌20min关闭热源，停止加热，压力随之逐渐降低。灭菌完毕降温及后处理斜面培养基自锅内取出后要趁热摆成斜面，灭菌后的空培养皿、试管、移液管等需烘干或晾干。 蛋白胨极易吸潮，故称量时要迅速培养基分装后加好塞在包装纸上标明培养基名称，制备组别和姓名、日期等思考题制备培