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1·生物制药：是指利用生物体或生物过程生产药物的技术。主要阐述生物药物，特别是生物工程相关药物的研制原理、生产工艺、分离纯化、制剂和生物药品分析技术的应用学科。 狭义生物技术药物即基因工程产品、抗体工程产品或细胞工程产品，如用大肠杆菌、酵母或哺乳动物细胞表达的重组蛋白、用杂交瘤技术生产的治疗性抗体、用细胞培养技术制备的组织工程产品等。 广义生物技术药物包括从血液、尿液或组织中提取的生物活性物质，用细胞培养方法生产的减毒或灭毒疫苗等。 2·生物技术（Biotechnology）：用活的生物体（或生物体的物质）来改进产品、改良植物和动物，或为特殊用途而培养微生物的技术。 3·生物工程（Bioengineering）：生物技术的统称，是指运用生物化学、分子生物学、微生物学、遗传学等原理与生化工程相结合来改造或重新创造设计细胞的遗传物质、培育出新品种，以工业规模利用现有生物体系，以生物化学过程来制造工业产品。简言之，就是将活的生物体、生命体系或生命过程产业化过程。 4·基因工程：就是把目的核酸分子与载体核酸分子在体外连接形成重组体，使新的重组体导入受体细胞并得到繁殖。 5·基因工程特征：具有跨越天然物种屏障的能力。 6·基因工程的基本操作程序：(1)目的基因的获取(2)基因表达载体的构建(3)将目的基因导入受体细胞(4)目的基因的检测与鉴定 7·基因工程技术就是将重组对象的目的基因插入载体，拼接后转入新的宿主细胞，构建工程菌（或细胞），实现遗传物质的重新组合，并使目的基因在工程菌内进行复制和表达的技术。 8·基因工程药物制造的主要程序：目的基因的克隆，构建DNA重组体，将DNA重组体转入宿主菌构建工程菌，工程菌的发酵，外源基因表达产物的分离纯化，产品的检验等。 基因工程药物制备的一般过程：获得目的基因→组建重组质粒→构建基因工程菌或细胞→培养工程菌→产物分离纯化→除菌过滤→半成品检定→成品检定→包装 上游：目的基因分离、工程菌（或细胞）构建。上游阶段的工作主要在实验室内完成。 下游：从工程菌（或细胞）的大规模培养一直到产品的分离纯化、质量控制等。 9·克隆目的基因的常用方法：PCR法、RT-PCR法、CDNA文库法和化学合成法。 10·PCR法用来克隆原核基因和不带内含子的真核基因。聚合酶链式反应，其英文Polymease Chain Reaction(PCR)是体外酶促合成特异DNA片段的一种方法,由高温变性、低温退火及适温延伸等几步反应组成一个周期,循环进行,使目的DNA得以迅速扩增,具有特异性强、灵敏度高、操作简便、省时等特点。 11·PCR法基本原理：试管中进行的DNA复制反应。依据：DNA半保留复制的机理；体外DNA分子于不同温度下可变性和复性的性质；通过人为控制体外合成系统的温度，使双链DNA变成单链,单链DNA与人工合成的引物退火；DNA聚合酶使引物沿着单链模板延伸为双链DNA。 12·PCR法技术流程：设计引物→提取基因组DNA→进行PCR反应→进行电泳检测 13·PCR的反应过程 预变性：使模板DNA的二级结构充分打开，让DNA双链充分解离,为了第一次退火过程时候引物可以尽量多的结合到模板上面。一般的PCR反应的预变性温度是94℃或95℃，预变性时间一般设为3-5min。 变性：使DNA双链解离变为单链。一般94℃～95℃，1min足以使模板变性:若低于94℃则需延长时间,但温度不能过高，因为高温环境对酶的活性有影响。 退火(复性)：使引物结合在模板上。退火温度是影响PCR特异性的重要因素。退火温度，取决于引物的长度、碱基组成及其浓度，还有靶基因序列的长度，一般在40-65 ℃之间。对于20个核苷酸，G+C含量约50%的引物，55℃作为选择最适退火温度的起点较为理想。 延伸：在DNA聚合酶的催化下，按照碱基互补配对原则不断合成DNA片段。延伸温度：一般选择在70～75℃之间。常用温度为72℃，过高的延伸温度不利于引物和模板的结合。延伸反应时间：根据待扩增片段长度而定。1Kb以内的DNA片段，延伸时间1min（足够）；3～4kb的靶序列需3～4min；扩增10kb需延伸至15min。延伸时间过长会导致非特异性扩增。对低浓度模板的扩增，延伸时间要稍长些。 引物设计的原则：（1）序列应位于高度保守区，与非扩增区无同源序列2）引物长度以15-40 bp为宜（3）碱基尽可能随机分布，G+C占50-60%4）引物内部避免形成二级结构（5）两引物间避免有互补序列。（6）引物 3’端的碱基要求严格配对（不能做任何修饰）， 5’端无严格限制7）引物5′端可修饰,引物5′端限定着PCR产物的长度，但对扩增特异性影响不大；引物5′端碱基可不与模板DNA互补而呈游离状态；引物5′端最多可加10个碱基而对PCR反应无影响。 14·RT-