1 材料与方法 1. 1 人新鲜脐带 由湖南省妇幼保健院提供。 1. 2 药物与试剂 略。 1. 3 人脐静脉内皮细胞的培养 用1640培养基常规培养。以Ⅷ因子相关抗原免疫 组化染色阳性,证实为内皮细胞。 1. 4 细胞冻融液促凝活性( PCA)的检测 采用一期凝固法。 1. 5 TF抗原测定 采用双夹心EL ISA 法, 具体过程依为A D I试剂盒说明进行。 1. 6 TF mRNA检测 用PCR 法检测。 反应条件为: 94℃变性5 min,再以94℃变性50 s,55℃退火50 s,72℃延伸1 min, 30个循环,最后再72℃延伸5 min。 材料与方法 1. 7 PKC活性测定 以Bradford法测定各部分蛋白质含量(通过测定底物的磷酸化分别测定胞浆及胞膜PKC活性高低)。 1.8 NF - κB 的检测 用免疫组织化学染色(培养的细胞用乙醇中固定和洗片后, 10%山羊血清37℃封闭,滴加兔抗人NF -κB多抗,以常规ABC方法进行免疫组织化学染色:滴加生物素化的羊抗兔IgG及生物素辣根过氧化物酶复合物(ABC) ,DAB呈色,封片后,镜检)。 1.9 统计学方法 组间均数比较用t检验,多组间比较用方差分析,行q检验。 (四)实验结果 实验结果 实验结果 2.1 内皮细胞的鉴定 (原代培养的人脐静脉内皮细胞呈单层生长,
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