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柱色谱 一 概 述 1906年时由俄国植物学家M.Tswett首先提出 在荣获诺贝尔科学奖（主要是化学奖和生理学医学奖）的科学家中，至少有20多位得益于这种分析手段。 奥地利化学家库恩（R.Kuhn）获得了1938年的诺贝尔化学奖 英国化学家马丁（A.Martin）及辛格（R.Synge） 获得1952年的诺贝尔化学奖 二 分 类 1.按固定相所处的状态分类 ： 柱色谱 （Column Chromatography） 纸色谱 （Paper Chromatography） 薄层色谱（Thin Layer Chromatography） 二 分 类 柱色谱 （Column Chromatography） 一类是固定相装在玻璃或金属管内，叫“填充柱色谱”； 一类是固定相吸附在一根细管内壁上，管子中心是空的，叫“开管色谱柱”或习称“毛细管色谱” ； 如果把固定相装在玻璃管内，再拉成毛细管，就叫“填充毛细管柱” 。 二 分 类 2.按分离机理分类： 吸附色谱（Adsorption Chromatography） 分配色谱（Partition Chromatography） 离子交换色谱（Ion Exchange Chromatography） 凝胶色谱（Gel Chromatography） 三 吸附色谱 吸附色谱体系是由吸附剂、溶剂和试样三者构成的，试样在吸附剂和洗脱剂作用下，反复地在柱中进行吸附－解吸，从而继续用洗脱剂连续展开，由于在两相吸附能力的差异，顺次从柱中流出而得到分离。 在吸附层析中，为要提高分离效果，必须充分考虑试样、洗脱剂和吸附剂三者关系。它们三者的关系如下图。 吸附色谱三要素 1 .吸附剂（adsorbents） 对吸附剂的基本要求是： 具有适度的活性较大的比表面积； 与洗脱剂及被分离物质不起化学反应； 不溶于洗脱剂中； 要有一定的均匀粒度； 吸附色谱三要素－吸附剂 ⑴ 氧化铝（alumina） 氧化铝的吸附活性来源于铝原子上未成键电子对。氧化铝的活性与含水量有关，含水量越低，活性越大，吸附力越强。无水氧化铝吸附活性特别强。根据氧化铝的含水量可将氧化铝的活性分为五级 。 吸附色谱三要素－氧化铝 吸附色谱三要素－吸附剂 酸性氧化铝（pH5～4），适用于分离酸性化合物和对酸稳定的中性化合物，如酚类物质和某些氨基酸类等。 中性氧化铝（pH＝7.5），适用与分离生物碱、挥发油、萜类、甾类、蒽醌以及在酸碱中不稳定甙类、酯、内酯等化合物。凡是能用酸性或碱性氧化铝层析分离的物质，中性氧化铝也都适用。 碱性氧化铝（pH9～10），适用于碱性，如生物碱和中性化合物的分离。 吸附色谱三要素－吸附剂 ⑵ 硅胶（silica gel） 它的吸附性来源于硅胶氧原子上未成键的电子对和可以形成氢键的羟基。羟基有结合型（Ⅰ）、活性型（Ⅱ）和游离型（Ⅲ）三种 吸附色谱三要素－吸附剂 硅胶，通常视为酸性吸附剂。一般用来分离一些酸性和中性有机物。如有机酸、萜类、氨基酸、甾类和一些甙类。 但是，对某些酸性弱的试样，在色层中有分解的危险。 此外，对于碱性物质可发生不可逆吸附。因此，对一些碱性物质在使用硅胶进行层析时，有必要进行预实验。 如在硅胶中拌入15％左右的硝酸银，这种加硝酸银的硅胶对有机物中不饱和键有特殊的吸附性，因此，常用它分离一些不饱和化合物。 吸附色谱三要素－吸附剂 ⑶ 活性炭（active carbon） 活性炭是使用较多的一种非极性吸附剂。活性炭的吸附性主要是由范德华力所引起，它的特点是对非极性物质，尤其是对芳香族化合物吸附性特别强。它可以在如水溶液那样强的极性溶剂中，吸附弱极性的有机化合物。此外，活性炭还具有分子筛的性能。 吸附色谱三要素－吸附剂 活性炭主要用于分离水溶液成分，如氨基酸、糖类及某些甙类。由于它在水溶液中对有机物吸附性特别强，在有机溶剂中则较弱，故水的洗脱能力最弱，而有机溶剂洗脱能力则较强。例如，用乙醇和水的混合溶剂进行洗脱时，则随乙醇浓度的递增而洗脱能力增强。又由于活性炭对芳香族化合物的吸附性大于脂肪族化合物；对大分子化合物的吸附性大于小分子化合物。因此，利用这些吸附性的差别，可将水溶性芳香族化合物与脂肪族化合物分开，单糖与多糖分开，氨基酸与多肽分开。 吸附色谱三要素－吸附剂 ⑷ 硅藻土（celite）： 硅藻土是由硅藻的硅质细胞壁组成的一种生物化学沉积岩。是一种吸附性非常弱的吸附剂，一般用在分离极性特别强的化合物和高度不饱和