MPN法测油田水及工业循环水中铁细菌阳性反应判定.doc

MPN法测油田水及工业循环水中铁细菌阳性反应判定 张迪彦，姚光源，王惠 （中海油天津化工研究设计院 300131） 摘要：本文通过ICP测铁离子浓度，革兰氏染色，扫描电镜，证明MPN法测水样中铁细菌数量，当测试瓶内仅出现红棕色沉淀，测试瓶上层液体棕色并未消失变透明时，并非铁细菌的阳性反应。为一些油田测铁细菌时的阳性反应判定提供参考。 关键词：MPN 铁细菌 阳性反应 Iron bacteria’s positive reaction by MPN method to measure oilfield water and industrial circulating water Zhang Diyan, Yao Guangyuan (CNOOC Tianjin Chemical Research Design Institute 300131) Abstract：By the method of ICP measured the concentration of iron ions, Gram stain, scanning electron microscopy, it is proved that when test bottle only appear reddish brown sediment and liquid brown did not disappear become transparent, was not the iron bacteria’s positive reaction, When used MPN method to measure water samples in the number of iron bacteria. It provided some references for oil fields measured iron bacteria. Key words：MPN; iron bacteria; positive reaction 铁细菌是一群在形态上和生理上都不完全相同的细菌，但其共同特征是能使水中铁的形式转化为沉淀，在工业生产中危害极大，是循环冷却水中的必检细菌[1-2]。目前测定铁细菌的常用方法为MPN法（最大可能数法），根据《中华人民共和国国家标准》GB/T 14643.6-1993 铁细菌的测定（MPN法）方法规定，凡测试瓶中产生褐色或黑色沉淀，且上层棕色消失变透明，表明有铁细菌存在[3]。《中华人民共和国石油天然气行业标准》SY/T 0532-93油田注入水细菌分析方法 绝迹稀释法规定，铁细菌培养7～14d，测试瓶中液体产生混浊或红棕色胶状物，即表示有铁细菌生长。企业标准并未明确规定铁细菌测试瓶反应为阳性时，测试瓶上层棕色消失变透明[4]。 本文称引起铁细菌测试瓶产生沉淀并上层棕色消失的细菌为铁细菌；而仅使铁细菌测试瓶产生棕色沉淀的细菌，为疑似铁细菌，对这两种菌进行深层剖析。 MPN法测定铁细菌的数量，即用无菌注射器将待测定的水样逐级注入到测试瓶中，进行接种稀释后，置于培养箱培养，根据测试瓶阳性反应和稀释的倍数，计算出水样中细菌量总数[5]。 1 ICP测量测试瓶液体中铁离子含量 1.1实验仪器 全谱直读电感耦合等离子体发射光谱ICP（美国利曼Prodigy） 铁细菌测试瓶（北京华西远大）Millipore纯水仪 恒温培养箱 1.2实验过程 ⑴选取两种水样：大庆聚驱水样，中海油天津化工研究院无磷动态水样， ⑵将两种水样各取1ml注入铁细菌测试瓶，35℃恒温培养为小瓶菌种。 ⑶各取两种水样小瓶培养菌种1mL，注入新的测试瓶，混匀后，取1mL或0.5mL，以高纯水稀释到100mL，于0℃保存，标记为培养前样品； ⑷将新测试瓶35℃恒温培养6天后，从测试瓶取1mL或0.5mL，以高纯水稀释到100mL，标记为培养后样品； 对培养前后的稀释水样ICP测量铁离子含量，得表1。 表1培养前后水样铁离子含量 样品 稀释200倍后铁离子含量/mg·L-1 铁离子减少百分比/% 小瓶菌种状态 1#大庆聚驱铁细菌 培养前 10.17 53 有大量黑色沉淀，液体几乎无色或稍微发蓝 培养后 4.77 2#无磷动态疑似铁细菌 培养前 8.45 2.3 有较多黄色沉淀，液体棕色发浊 培养后 8.26 1.3结果与讨论 MPN法测量铁细菌，样品中的铁细菌能使测试瓶中的硫酸亚铁氧化为氢氧化铁沉淀，因此，样品中如果有铁细菌，在培养前后，测试瓶液体中的铁离子应会明显减少。 由表1可知： ⑴从1#样品看，测试瓶中有大量黑色沉淀，液体棕色退为几乎无色或稍微发蓝。培养后水样比培养前水样，铁离子含量减少53%，此菌为典型的铁细菌； ⑵从2#样品看，测试瓶瓶内仅仅出现沉淀，上层棕色液体并