牛分枝杆菌系统进化及鉴定-欧喜超辩析.pptxVIP

1 牛分枝杆菌系统进化及鉴定方法 欧喜超 全国结核病实验室工作会 结核分枝杆菌复合物(或群) 2 结核分枝杆菌（1882） 非洲分枝杆菌（西非Ⅰ型和西非 Ⅱ 型，1968） 牛分枝杆菌（1970）、BCG（1957） 田鼠分枝杆菌（1957） M. origys, Dassie bacillus, M. mungi, M.pinnipedii, M.caprae, 卡内迪分枝杆菌(Smooth tuberculosis bacilli, STBs,1997) 1882年，德国科学家Koch发现结核病的病原菌结核分枝杆菌， 1898年， Smith通过 培养特征的差异将结核分枝杆菌和牛分枝杆菌区分开来。 牛结核分枝杆菌 结核分枝杆菌为细长略带弯曲，牛分枝杆菌较粗短。 牛分枝杆菌生长缓慢，专性需氧，初次分离培养时， 需36-37℃培养5-8周可出现菌落（推荐观察10-12周）。 结核分枝杆菌和牛分枝杆菌的培养温度均为37℃～ 38℃。培养时最适pH值，结核分枝杆菌为7.4～8.0， 牛分枝杆菌为5.9～7.4。 从标本内分离牛分枝杆菌或作为本菌的传种及保存 需使用丙酮酸钠培养基（丙酮酸钠替代丙三醇）。 3 牛结核病 4 “在那些还流行牛结核病的国家中，人类始终受到该病的威胁，除非消灭牛结核病，否则人类结核病的控制是不会成功的” 摘自1960年《世界卫生组织专家委员会第七次会议》 2003年，广东检验检疫总局从美国进境的142头良种奶牛中，检出19例患有 结核病，打破了美国25年来没有牛结核病的说法； 20世纪50年代我国出现了牛结核病的大暴发，1955年检出阳性率达36.4％， 以后由于采取有效措施使结核病阳性率大大降低并控制在较低水平； 1985年和1987年，我国两次全国奶牛抽样调查结果显示，牛结核病的患病率 分别为5.83%和5.43%； 2007-2008年，对来自东北和西北六个牧场，1067头PPD阳性牛鼻拭子分离鉴 定发现，人型结核分枝杆菌感染率为2.72%（29/1067），牛分枝杆菌感染率 为1.31%（14/1067）。 牛结核病 5 19世纪末20世纪初，发达国家中牛分枝杆菌感染占全部结核患者的25%，20 世纪末感染比例降至0.5%-7.2%； 1990-2003年，英国每年有17-50例患者感染牛分枝杆菌，占全部培养阳性患者 的0.5%-1.5%； 2005-2007年，武汉市结核病医院的回顾性调查发现，该院人感染牛分枝杆菌 的患病率为0.34%（17/5011）； 2010-2011年，新疆喀什胸科医院313例培养阳性患者菌株分离鉴定发现牛分 枝杆菌感染患者1例，占全部患者的0.32%（1/313）。 人感染牛分枝杆菌 6 牛分枝杆菌在复合群菌株进化中的位置 人型结核分枝杆菌起源于牛型结核分枝杆菌？？？ 7 1998年,首次完成了人结核分枝杆菌H37Rv全基因组序列图，牛结核杆 菌的全基因组序列于2003年完成，牛分枝杆菌全基因组序列较结核分枝杆菌小得多。 全基因组序列图 8 在牛分枝杆菌和肺结核分枝杆菌H37Rv间存在着2437个单核苷酸多态性（SNPs），与肺结核分枝杆菌CDC1551间存在着2423个单核苷酸多态性SNPs。 在核苷酸水平上，牛分枝杆菌与结核分枝杆菌基因组相比，其同源性大干99.95％，表现出共线性，没有广泛的置换、复制或倒置现象。 牛分枝杆菌与肺结核分枝杆菌全基因组序列比对分析 9 采用比较特定基因方法发现，结核分枝杆菌复合群各种菌株存在基因数目可变区。结核分枝杆菌基因组中的一些片段在牛分枝杆菌或卡介苗(BCG)基因组中缺失，这些缺失片段被称为差异区(region of differences，RD区) 。 利用杂交实验检测到16个差异区(RD1—16)，大小在2～12.7kb之间。卡介苗巴斯德株缺失这些RD区，但结核分枝杆菌H37Rv存在RD区，结核分枝杆菌H37Rv相关缺失区l-5(RvD1-5)以及TbD1在结核分枝杆菌H37Rv中均存在缺失。 大片段序列多态性分析（LSP）发现，某些缺失区仅存在于特定的复合群亚种内，推测缺失区与复合群各成员的系统进化存在一定联系。 差异区域(RD区) 10 牛分枝杆菌在结核分枝杆菌复合群系统进化中的位置 （Aranaz, 2014） 11 RDl、RD2、RDl4和RDl6在牛分枝杆菌基因组中存在，在BCG基因组中缺失。 (M. Coscolla, 2014) 12 Progenitor bac