对氧磷酶2C311S基因多态性与脑梗死的关系.docVIP

对氧磷酶2 C311S基因多态性与脑梗死的关系 　　作者：赵真 包正军 许宏伟 肖 波 杨晓苏 杨期东 作者单位：(湖南株洲市一医院神经内科，湖南 珠洲 412000) 　　【摘要】 目的 探讨对氧磷酶 2(paraoxonase 2, PON2)基因多态性与湖南地区人群脑梗死的关系。方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析法(PCRRFLP)探查 PON2基因C311S多态性在脑梗死组和正常对照组的基因频率。结果 发现湖南地区人群存在 PON2 C311S基因多态性， S /C等位基因频率 0.727/0.273。脑梗死患者 PON2基因C311S的基因型和等位基因频率与正常对照组相比无显著差异 (P0.05)。脑梗死组CC基因型HDL水平明显低于SS、CS两型(P0.05)。结论 PON2基因第311位密码子的多态性与湖南地区人群脑梗死的发病无关，而可能与脑梗死患者的高密度脂蛋白水平有关。 　　【关键词】 脑梗死;对氧磷酶2;基因多态性 　　许多研究证实高密度脂蛋白(HDL)具有多种抗动脉粥样硬化(Atherosclerosis,AS)的性质,而HDL防止AS始动过程主要是通过其特有的抗氧化酶-对氧磷酶1(Paraoxonase1,PON1)实现的,对氧磷酶家族从而得到广泛关注。PON基因家族位于7号染色体长臂21.3～22.1区,由PON1、PON2和PON3 3个基因组成〔1〕。PON2是这个的家族的第二个成员，分别在位点311和148拥有基因多态性〔2〕。目前研究认为PON2具有广泛的抗细胞氧化作用，也就是具有抗AS作用。脑梗死与AS关系密切，但PON2与脑梗死的关系如何，关于PON2基因C311S多态位点与脑梗死的关系少见报道〔3〕，与湖南地区人群脑梗死关系的研究尚未见报道。本文采用病例对照研究,探讨PON2基因C311S多态性在湖南地区人群中的分布情况及其与脑梗死的关系。 　　1 资料和方法 　　1.1 对象 收集湖南汉族脑梗死患者血标本180例，经临床及 CT和(或)磁共振成像(MRI)确诊(依照第四届全国脑血管病学术会议诊断标准)，不包括心律失常、动脉炎、外伤、血液病、药物、肿瘤、脑血管畸形或动脉瘤等引起的脑梗死 ;排除蛛网膜下腔出血，肝、肾疾病，自身免疫性疾病，妊娠者，半年内曾有降脂治疗者。对照组为湖南汉族健康体检者120例，排除脑血管病，脑血管病家族史，肝、肾、血液、自身免疫性疾病，妊娠，半年内有降脂治疗者。 　　1.2 方法 　　1.2.1 试剂 dNTPs、TaqDNA 聚合酶、DNA 片段长度标记物均由深圳晶美生物工程有限公司提供加拿大 MBI公司的产品;限制性内切酶由美国 Promega公司提供 ;琼脂糖购自北京鼎国生物公司。 　　1.2.2 引物 PCR引物参照文献〔4〕,序列为:上游引物：5′tgggtcaatgttgctggtta3′,下游引物：5′catgcatgtacggtggtctt3′，由深圳英骏生物技术有限公司合成。 　　1.2.3 DNA的制备及PCR扩增、基因型分析 (1)基因组 DNA的制备:采外周静脉血2～3 ml用明胶沉淀红细胞，提取白细胞后用酚/氯仿抽提其中的基因组 DNA。(2)目的基因的 PCR扩增: 94℃预变性240 s,94℃变性30 s，56℃退火45 s，72℃延伸50 s，共反应30循环。72℃终末延伸5 min，最后置于4℃终止反应。4℃冰箱保存。(3)PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳鉴定，溴化乙锭染色，凝胶电泳成像分析系统内观察。PCR产物长度为299 bp。PONC311S多态性由内切酶DdeI识别，37℃消化2～4 h。酶切产物用琼脂糖凝胶(含溴化乙啶)电泳分离,紫外灯下照相后阅读效果。 　　1.3 统计学分析 统计学分析采用 SPSS11.0软件包，等位基因频率=(2×纯合子+杂合子)/(2×受检人数)。组间等位基因和基因型频率的差异用Χ2检验。计量资料两组比较用t检验，两组以上用方差分析。计算每组基因型频率及等位基因频率，经计算符合 HardyWeinbery平衡定律，样本具有群体代表性。 　　2 结 果 　　2.1 PON2基因C311S的PCR扩增产物限制性内切酶片段长度多态性 见图1。PON2基因第九号外显子第311位密码子发生TCT→TGT突变，导致编码氨基酸由丝氨酸(serine,S)转变为半胱氨酸(cysteine，C),失去DdeI酶切位点。PON2基因C311S的PCR产物酶切后拥有74、67、128、30 bp四条碱基片段的是SS型纯合子;拥有141、128、30 bp三条碱基片段的是CC型纯合子;拥有