微生物学_02微生物的纯培养和显微技术分析.pptxVIP

第二章微生物的纯培养和显微技术主要内容：培养物（culture）：在微生物学中，在人为规定的条件下培养、繁殖得到的微生物群体纯培养物（pureculture）：只有一种微生物的培养物显微技术是微生物研究的另一项重要技术个体小2.1微生物的分离和纯培养2.1.1无菌技术2.1.2.用固体培养基分离纯培养2.1.3.用液体培养基分离纯培养2.1.4.单细胞（孢子）分离2.1.5.选择培养分离2.1.6.二元培养物无菌技术：在分离、转接及培养纯培养物时防止其被其它微生物污染的技术。它是保证微生物学研究正常进行的关键A微生物培养的常用器具B最常用灭菌方法C接种操作2.1.1无菌技术A微生物培养的常用器具常用器具：试管、玻璃烧瓶、平皿等器皿都要灭菌培养基：培养微生物营养物质。压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌超净工作台：为操作提供无菌环境紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒A微生物培养的常用器具B最常用的灭菌方法1.干热灭菌：一般玻璃用具，如培养皿、吸管等用报纸包好后，放烘箱中，使温度逐渐升至150～160℃，保持2小时后，关闭电源，使缓慢冷却（降温太快时玻璃易碎），即灭菌完毕。①常压法（间歇灭菌法）：是用蒸汽锅（或普通锅）蒸，温度不超过100℃。每次一小时，共三次，每次间隔24小时（杀死孢子）。2.湿热灭菌：利用蒸气杀菌。②高压法：锅内增加压力时则温度随之增高。温度为112.6℃；灭菌30分钟。　温度为120～121℃；灭菌20分钟。3.过滤除菌法本法系用滤过方法除去活的或死的微生物的方法，是一种机械除菌的方法。本法主要用于对热极不稳定的药物小针剂或冻干粉针制剂的除菌。除菌过滤器采用孔径分布均匀的微孔滤膜作过滤材料，为保证阻止细菌和细菌孢子通过滤器，滤膜的孔径一般不超过0.22μm。对于接种针或其它金属用具灭菌，可直接在酒精灯火焰上烧至红热。此外在接种过程中，试管或三角瓶口，也采取通过火焰达到灭菌的目的。4.火焰灭菌：①70％的酒精：操作前手或器皿的表面杀菌，载玻片，盖玻片的浸泡等。②1:1000新洁尔灭溶液，浸泡时间为30分钟，常用于表面的消毒。③福尔马林（40％甲醛液）：用于空间熏蒸灭菌，加热或加高锰酸钾使其放出甲醛气体。注意将空间密闭并维持24小时。5.药物灭菌：6.紫外线灭菌用于接种室等空气灭菌。压力蒸汽消毒器：湿热消毒，用途广电热干燥箱：干热消毒（160℃，2小时）。主要用干玻璃器皿消毒滤器：过滤除菌，大多数培养用液，如人工合成培养基、血清、酶液等均采用滤过法除菌超净工作台：为操作提供无菌环境紫外灯：紫外线消毒。主要用于培养室空气、操作台、塑料培养皿和培养板等表面消毒常用的灭菌器具C接种操作—最基本技术用接种针或接种环分离微生物，或将微生物从一个培养器皿转接到另一个培养器皿进行培养。火焰旁边或无菌箱或无菌室进行。接种针采用可以迅速加热和冷却的镍铬合金制备；液体培养物用无菌移液管或移液器无菌操作台火焰旁无菌区超净台超净工作台的工作原理是利用鼓风机驱动空气遁过高效滤器除去空气中的尘埃颗粒，使空气得到净化。净化空气徐徐通过工作台面，使工作台内构成无菌环境。2.1.2用固体培养基分离纯培养菌落（colony）：由单个微生物在适宜的固体培养基表面或内部生长、繁殖到一定程度后，形成肉眼可见的、有一定形态结构的子细胞生长群体。菌苔(lawn)：固体培养基表面众多菌落连成一片，呈片状，这就是菌苔。A相关概念1——菌落与菌苔菌落的大小、形状、边缘状况、质地、光泽、颜色及透明度等是微生物分类、鉴定的重要依据。细菌菌落菌落的形态是鉴定菌种的重要特征放线菌在固体培养基上形成与细菌不同的菌落特征，放线菌菌丝相互交错缠绕形成质地致密的小菌落，干燥、不透明、难以挑取，当大量孢子覆盖于菌落表面时，就形成表面为粉末状或颗粒状的典型放线菌菌落。放线菌菌落酵母菌落A相关概念2——纯种微生物的分离在自然界中，各种各样的微生物总是混杂在一起的，要研究和利用某一微生物，就必须把它同其他微生物分开，才能得到只含有同一种微生物的纯种微生物。这种方法叫纯种微生物的分离大多数细菌、酵母菌、以及许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落，采用适宜的平板分离法很容易得到纯培养。A相关概念3——培养平板（cultureplate）克隆（clone)：一个单细胞繁殖形成的菌落，即一个纯种细胞群或克隆。固体培养基：琼脂或其它凝胶物质固化的培养基。平板：即培养平板（cultureplate),融化的固体培养基倒入无菌平皿冷却凝固后即为平板，用于分离、培养微生物。B纯种微生物的分离方法稀释倒平板法涂布平板