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例10. 分别用0.5mol/L NaOH和pH4.00的邻苯二甲酸氢钾缓冲溶液，配制某弱酸溶液，浓度均为含该弱酸0.001g/100ml。在λmax=590nm处分别测出三者吸光度如下表。求该弱酸的pKa值。（学习指导P104 3题） 例11.有一酸碱指示剂本身为一元弱碱，将它配成8.00×10-5mol/L的溶液后，分3次移取各25.00ml到3个50ml容量瓶中。第一瓶加10ml 1mol/L的NaOH，第二瓶加10ml 1mol/L的HCl，第三瓶加20ml pH8.00的缓冲溶液。然后各稀释到刻度后，用1cm比色皿得如下数据：（学习指导P113 15题） 例12.用分光光度计研究某一弱酸HA，为此配制了一系列弱酸总浓度相同而pH不同的溶液。用pH计测定其pH值，用1cm比色皿在波长为530nm处测量吸光度，得如下数据，求此弱酸的离解常数Ka。（学习指导P113 10题） 解：由公式 （1） ① ② ③ ④ ⑤ 将上述5组数据分别代入公式（1），计算出各组pKa，并对5个pKa求平均值，结果得： Ka=1.16×10-5 0.00 0.00 0.16 0.50 0.92 1.40 1.78 2.00 2.00 A 7.50 7.00 6.00 5.40 5.00 4.60 4.00 3.00 2.50 pH 酸性HA 碱性A- 混合 计算公式 A混4 =0.50 pH混4=5.40 A混1 =1.78 pH混1=4.00 A混2 =1.40 pH混2=4.60 A混3 =0.92 pH混4=5.00 A混4 =0.16 pH混4=6.00 * 第三节 紫外-可见分光光度分析方法（1） 一、定性分析 定性鉴别 纯度检查和杂质限量测定 单组分的定量方法 多组分的定量方法 二、定量分析 要求： 1.掌握紫外-可见分光光度法单组分定量的各种方法和多组分定量的双波长法； 2.熟悉用紫外-可见分光光度法对化合物进行定性鉴别和纯度检查的方法； 3.熟悉多组分定量的其他方法。 一、定性鉴别：利用紫外-可见分光光度法对有机化合物进行定性鉴别的主要依据就是对比吸收光谱的特征 吸收光谱的形状 吸收峰的数目 吸收峰的位置（波长） 吸收峰的强度 相应的吸光系数 1．对比吸收光谱特征数据：最常用的是吸收峰所在的波长(λmax)，并存的谷和肩峰以及ε或 也可作为定性的依据。 左图的两个化合物均为3-酮基4-烯基甾类化合物，在无水乙醇中λmax相同，但 有明显差异，可资鉴别。 定性鉴别的方法→对比法和核对参考文献法 ： 2．对比吸收光谱的一致性 用 作鉴别，不能发现吸收光谱曲线中其他部分的差异。必要时，需将试样与已知标准品配制成相同浓度的溶液，在同一条件下分别描绘吸收光谱，核对其一致性。只有在光谱曲线完全一致的情况下才有可能是同一物质。 右图三个甾体化合物几乎有完全相同的λmax(240nm)、 (390)与ε(1.57×104),但从它们的吸收光谱曲线上可以看出其中的某些差别，据此可以得到鉴别。 3．对比吸光度或吸光系数的比值：不只一个吸收峰的化合物，可用在不同吸收峰处（或峰与谷）测得吸光度的比值作为鉴别的依据。 例 注意：紫外光谱简单，峰少，用于定性并不理想，否定一个化合物较易，而肯定一个化合物有一定难度。 二、纯度检查 1.杂质检查：在紫外-可见光区主成分和杂质之间如果： 1）峰位不重叠： 找λ→使主成分无吸收，杂质有吸收→直接考察杂质含量 例 乙醇和环己烷中若含少量杂质苯，苯在256nm处有吸收峰，而乙醇和环己烷在此波长处无吸收，乙醇中含苯量低达0.001%也能从光谱中检查出来。 2．杂质限量的测定：对于药物中的杂质，常需制定一个容许其存在的限量。 1）直接求算杂质的含量： 例如：肾上腺素在合成过程中有一中间体肾上腺酮，当它还原成肾上腺素时，反应不够完全而带入产品中，成为肾上腺素杂质，而影响肾上腺素疗效。因此必须规定肾上腺酮的量。 2）峰位重叠： 主成分强吸收，杂质无吸收 / 弱吸收→与纯品比较，E↓ 杂质强吸收 主成分吸收→与纯品比较，E↑，光谱变形。 肾上腺素中微量杂质——肾上腺酮含量计算 方