(1)分光光度法(spectrophotometry):多利用产物在紫外或可见光部分的光吸收性质,选择适当波长,测定反应过程的进行情况。简便、节约时间和样品,可以检测nmol/L水平的变化。 (2)荧光法(fluorometry):主要利用底物或产物的荧光性质。灵敏度高,但易受到干扰。 (3)同位素测定法:同位素标记底物,反应后经分离,检测产物的脉冲数,即可换算成酶的活力单位。灵敏度最高。 (4)电化学方法:pH计、 氧电极法 (二)酶的分离和纯化 酶的分离提纯方法,也就是常用来分离提纯蛋白质的方法。 (1)把很大体积的酶制剂浓缩到较小体积; (2)把酶制剂中大量的杂质蛋白和其它大分子物质分离出去。 判断分离提纯方法的优劣,用总活力的回收和比活力提高的倍数来衡量。 过程:①选材;②破碎;③抽提;④分离及纯化;⑤结晶;⑥保存。 六、核 酶(ribozyme) *Ribozyme是一种RNA生物催化剂 Ribozyme的发现:RNA具有酶的催化功能是由Cech T.R于1982年提出的。1981年,发现四膜虫(tetrahymena thermophila)的26S rRNA前体在成熟过程中,其居间序列通过剪接反应被除去。并证明四膜虫rRNA前体的居间序列核糖核酸(L-19RNA)具有多种催化功能,将这种具有催化活性的RNA称为 Ribozyme (ribonucleic a
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