5.3 血红蛋白的提取和分离课稿.pptVIP

二、实验操作 蛋白质的提取和分离步骤： 1、样品处理： 2、粗分离： 3、纯化： 4、纯度鉴定： 透析过程 * * * * 专题5 课题3 血红蛋白的提取和分离 1.凝胶色谱法 小分子穿过多孔凝胶颗粒的内部，路程长，流动慢； 大分子通过多孔凝胶颗粒的外部，路程短，流动快。 洗脱：从色谱柱上端不断注入缓冲液，促使蛋白质分子向下差速流动。 混合物 上 柱 洗 脱 大分子流动快 小分子流动慢 收 集 大分子 收 集 小分子 例题1 2.缓冲溶液－－洗脱剂 5.3% 94.7% 8.0 39% 61% 7.0 87.7% 12.3% 6.0 0.2mol/L NaH2PO4 0.2mol/L Na2HPO4 pH 调节缓冲剂的使用比例就可制出不同pH范围内使用的缓冲液 3．电泳： 影响蛋白质分子运动速度的因素 ? 运动方向 电场力 阻力 运动速率 电荷性质 电荷量 分子形状 分子大小 √ √ √ √ √ √ √ SDS所带电荷量远大于蛋白质所带电荷量，因而掩盖了不同蛋白质的电荷差别，使电泳速度取决于分子大小。 基础训练 1、2 琼脂糖凝胶电泳 训练1 ③分离血红蛋白溶液。 ②血红蛋白释放； ①洗涤红细胞； 透析。 凝胶色谱法。 通过聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定。 注意事项 1.洗 涤 红 细 胞 复习思考： 血液由______和________两部分组成。 血细胞中_______细胞数量最多，细胞的含量最高的有机化合物是_____________。 血红蛋白是由 _____________和____________构成的，其中每个亚基中都含有一个能与O2和CO2结合的______________________基团，因此一个血红蛋白分子一次能运载____个O2分子。 血浆 血细胞 红细胞 血红蛋白 2条α-肽链 2条β-肽链 亚铁血红素 4 1.洗 涤 红 细 胞 思考：洗涤的目的是什么？洗涤的方法是什么？ 洗涤干净的标志是什么？ 血液 柠檬酸钠 低速短时离心 吸出血浆 红细胞 5倍体积生理盐水 重复洗涤3次，直至上清液没有黄色 红细胞 血 浆 其他血细胞 基础训练 4 2.血红蛋白的释放 释放血红蛋白过程中，加入了哪些物质？ 这些物质有何作用？ 蒸馏水的作用是______________________________。 加入甲苯的作用是____________________________。 充分搅拌的目的是____________________________。 使红细胞吸水胀破 溶解细胞膜，加速破裂 加速破裂 3.分离血红蛋白溶液 混合液 高速离心 10min 离心管 3.分离血红蛋白溶液 离心管 甲苯层（无色透明） 脂类物质（白色薄层固体） 血红蛋白溶液红色透明液体 红细胞碎片沉淀（暗红色） ①留于离心管底部 ②过滤 ③分液漏斗分离 4、透析 透析的目的是什么？ 去除血红蛋白中的小分子杂质