7.RNA的生物合成课稿.ppt

7.1 基本概念 生物体以DNA为模板合成RNA的过程 。 参与转录的物质 原料: NTP (ATP, UTP, GTP, CTP) 模板:DNA 酶: RNA聚合酶 其他蛋白质因子 转录的不对称性： 在RNA的合成中，DNA的二条链中仅有一条链可作为转录的模板，称为转录的不对称性。 大肠杆菌RNA聚合酶的组成分析 RNA聚合酶与DNA聚合酶的区别 -10序列 (Pribnow框盒) 其保守序列为TATAAT，位于-10bp左右，其中3′端的“T”十分保守。 A.T较丰富，易于解链。 它和转录起始位点I一般相距5bp。 功能: RNA pol紧密结合; 形成开放启动复合体； 使RNA pol定向转录。 -35序列 (Sextama盒) 其保守序列为TTGACA， 与-10序列相隔16-19bp。 功能: (1)为RNA pol的识别位点。 (2)RNA Pol的核心酶只能起到和模板结合和催化的功能，并不能识别-35序列，只有σ亚基才能识别-35序列，为转录选择模板链。 －10区和－35区的最佳距离 在原核生物中， －10区和－35区的最佳距离大约是16～19 bp。 过大或过小都会降低转录活性。 这可能是因为RNA Pol本身的大小和空间结构有关。 Rho非依赖型终止子的序列 终止效率与二重对称序列和寡聚U的长短有关，长度 效率 真核生物的启动子特点 （1）有多种元件：TATA框，GC框，CATT框，OCT等； （2）结构不恒定。有的有多种框盒,如组蛋白H2B；有的只有TATA框和GC框，如SV40早期转录蛋白; （3）它们的位置、序列、距离和方向都不完全相同; （4）有的有远距离的调控元件存在，如增强子； （5）这些元件常常起到控制转录效率和选择起始位点的作用； （6）不直接和RNA pol结合。转录时先和其它转录激活因子相结合，再和聚合酶结合。 SARS病毒的复制 冠状病毒成熟粒子中，并不存在RNA病毒复制所需的RNA聚合酶, 它进入宿主细胞后，直接以病毒基因组RNA为翻译模板，表达出病毒RNA聚合酶。 再利用这个酶完成负链亚基因组RNA（sub-genomic RNA）的转录合成、各种结构蛋白mRNA的合成，以及病毒基因组RNA的复制。 冠状病毒各个结构蛋白成熟的mRNA合成，不存在转录后的修饰剪切过程，而是直接通过RNA聚合酶和一些转录因子，以一种“不连续转录的机制，通过识别特定的转录调控序列有选择性的从负义链RNA上，一次性转录得到构成一个成熟mRNA的全部组成部分。 结构蛋白和基因组RNA复制完成后，将在宿主细胞内质网处装配（assembly）生成新的冠状病毒颗粒，并通过高尔基体分泌至细胞外，完成其生命周期。 2 8-氮鸟嘌呤形成核苷酸后，能抑制嘌呤核苷酸的合成，还能少量掺入到DNA中。但最主要的是地掺入到RNA中，形成不正常的RNA，并因此而抑制蛋白质的合成。 3 6-氮尿嘧啶在体内先转变成核苷，再转变成核苷酸，后者对乳清苷酸脱羧酶有明显的抑制作用，但通常不掺入到RNA中。6-氮尿嘧啶核苷二磷酸能抑制多核苷酸磷酸化酶，其核苷三磷酸抑制DNA指导的RNA聚合酶。 7.5.2 DNA模板功能的抑制剂 有些化学物质能与DNA结合使其失去模板功能，从而抑制其复制和转录，某些重要的抗癌和抗病毒药属于这类抑制剂。 (1) 烷化剂 氮芥、磺酸酯(sulfonate)、氮丙啶(aziridine)、乙烯亚胺类衍生物等带有能使DNA烷基化的活性烷基。烷基化位置主要在鸟嘌呤的N7上，腺嘌呤的N1、N3和N7以及胞嘧啶的N1也有少量烷基化。G烷基化后易水解脱落，其空缺可干扰DNA复制或引起碱基错配。带有两个活性基团的烷化剂能同时作用于DNA两条链，使之发生交联，抑制其模板功能。磷酸基也可被烷基化，形成的磷酸三酯不稳定，导致DNA链断裂。 (2) 放线菌素 放线菌素有一个吩噁嗪酮稠环和两个五肽环(L-N-甲基缬氨酸、肌氨酸、L-脯氨酸、D-缬氨酸、L-苏氨酸)，可与DNA形成非共价复合物，抑制其模板功能。 放线菌素D抑制模板功能的机制是其吩噁嗪酮稠环插入DNA的G-C碱基对之间，DNA互补链上G的2-氨基与环肽的L-苏氨酸羰基氧形成氢键，其多肽部分位于双螺旋的小沟上，如同阻遏蛋白一样抑制DNA的模板功能。与此类似的色霉素A3、橄榄霉素、光神霉素等抗癌抗生素，都能与DNA形成非共价复合物而抑制其模板功能。 (3) 嵌入染料 某些