G―RH2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究.docVIP

G―RH2诱导人肺腺癌A549细胞凋亡的实验研究 【摘要】 目的 探讨人参皂甙RH2（G-RH2）对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法 分析G-RH2对A549细胞周期及细胞凋亡的影响， 并检测G-RH2对A549细胞相关基因表达的影响。结果 0～60 μmol的G-RH2作用A549细胞72 h后， 实验组G1期细胞比率随药物浓度的增加而增加， S期细胞比率随药物浓度的增加而递减， G2期细胞无明显变化。Bax、Bid及Cyto-C表达量随药物浓度增加而增加， Bcl-2、细胞外信号调节激酶（ERK）及P-ERK表达量随药物浓度的增加而降低。结论 G-RH2可以诱导人肺腺癌A549细胞凋亡， G-RH2抗肿瘤药物值得临床开发和应用。 【关键词】 人参皂甙RH2；肺腺癌；A549细胞；细胞凋亡 DOI：10.14163/j.cnki.11-5547/r.2016.11.215 G-RH2， 即四环三萜类寡低糖链人参二醇型皂甙单体， G-RH2可以通过诱导分化或者诱导调亡， 抑制多种肿瘤细胞的生长、增殖， 而且其具有很强的抗肿瘤活性[1]， 本实验以人源肺腺癌细胞A549为研究对象， 主要运用流式细胞技术检测G-RH2处理的A549细胞周期改变情况， 最后从蛋白水平用Westen blotting方法验证特定蛋白表达水平的变化， 探讨其发挥抗肿瘤效应的关键蛋白及分子信号传导通路， 希望通过研究能促进G-RH2抗肿瘤药物的进一步开发和更广泛的临床应用。现将研究结果报告如下。 1 材料与方法 1. 1 材料 延边大学药学院药物分析实验室提供的人肺腺癌A549细胞系。 1. 2 方法 从-80℃冰箱中取出A549细胞冻存管先进行细胞复苏、细胞培养及细胞传代， 用G-RH2处理A549细胞， 采用流式细胞技术分析G-RH2对A549细胞周期及细胞凋亡的影响；对G-RH2处理A549细胞提取蛋白质并测定蛋白质浓度， 电泳， 并用Westren blotting化学发光显影定影检测G-RH2对A549细胞相关基因表达的影响。 2 结果 2. 1 G-RH2对A549细胞周期及凋亡的影响 分别以 0、10、20、40、60 μmol的G-RH2作用A549细胞72 h后， G1期细胞比率分别为（61.3±2.1）%、（65.4±1.8）%、（68.9±2.4）%、（78.8±1.7）%、（85.3±1.5）%； S期细胞比率分别为（26.3±2.1）%、（22.3±2.4）%、（16.3±1.5）%、（11.3±1.5）%、（9.3±2.3）%；G2期细胞比率分别为（12.4±1.3）%、（12.3±1.4）%、（14.8±2.0）%、（9.1±1.7）%、（6.4±1.3）%， 经比较可见G-RH2作用于A549细胞后， A549细胞的凋亡比率呈浓度依赖性递增， G1期细胞比率随药物浓度的增加而增加， S期细胞比率随药物浓度的增加而递减， 波峰前移， G2期细胞无明显变化。 2. 2 G-RH2对A549细胞凋亡相关蛋白表达的影响 分别以0、10、20、40、60 μmol的G-RH2作用A549细胞72 h后， Western bolt法检测Bcl-2家族系列蛋白的表达变化， 以β-actin为内参对照。Bax的表达量分别为（112.56±0.65）%、（123.77±2.17）%、（136.74±1.17）%、（147.61±0.77）%、（159.38±0.53）%；Bcl-2的表达量分别为（183.28±0.79）%、（178.31±1.35）%、（177.90±1.24）%、（166.96±0.47）%、（147.15±1.41）%；Bid的表达量分别为（97.18±0.60）%、（99.94±0.06）%、（105.02±0.99）%、（104.95±0.53）%、（126.98±0.43）%；Cyto-C的表达量分别为（108.38±0.51）%、（114.44±0.30）%、（122.68±0.46）%、（126.26±0.59）%、（133.04±0.44）%；EPK的表达量分别为（46.28±0.10）%、（58.74±0.53）%、（89.31±0.69）%、（49.53±0.50）%、（38.90±2.11）%；P-ERK的表达量分别为（160.26±0.59）%、（169.32±0.37）%、（173.62±0.44）%、（174.03±0.64）%、（181.71±0.51）%；经比较可见G-RH2作用A549细胞后， Bax、Bid及Cyto-C表达量随药物浓度增加而增加， Bcl-2、ERK及P-ERK表达量随药物浓度的增加而降低。 3 讨论 流式细胞仪检测肯定了G-RH2诱导A549细胞凋亡的作用。阻滞细