pIRES2―NGF―NT―3真核表达载体的构建与鉴定.docVIP

pIRES2―NGF―NT―3真核表达载体的构建与鉴定 　　摘要：构建双基因共表达载体pIRES2-NGF-NT-3并检测其在HEK293细胞中的表达。人神经生长因子（nerve growth factor， NGF）和神经营养素3（neurotrophin-3，NT-3）是采用直接PCR的方法从人外周血单个核细胞的基因组DNA中获取，将人神经生长因子的cDNA片段插入到pIRES2-EGFP多克隆位点构建成为pIRES2-NGF-EGFP神经营养素3cDNA片段通过替换绿色荧光蛋白基因（EGFP）的方式插入到pIRES2-NGF-EGFP中构建成为pIRES2-NGF-NT-3双基因共表达载体，将pIRES2-NGF-NT-3用脂质体转染HEK293细胞并采用RT-PCR与Western-blot的方法检测其表达。人神经生长因子和神经营养素3被克隆，通过测序和酶切鉴定的得知与基因库报道序列一致。pIRES2-NGF-NT-3转染HEK293细胞后双基因在mRNA和蛋白水平均得到了表达。人神经生长因子和神经营养素3双基因真核表达载体成功构建，它提供了一个新的表达系统，为进一步研究双基因的功能奠定了基础。 　　关键词：人神经生长因子；神经营养素3；真核双表达裁体；内部核糖体进入位点 　　中图分类号：Q812 　　文献标识码：A 　　文章编号：1007-7847（20