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硝酸还原酶（NR）活性的测定.ppt
2 * * 硝酸还原酶(NR)活性的测定 制作人： 车永梅 单 位： 生命科学学院 一、实验目的 了解硝酸还原酶在氮代谢中的地位，掌握硝酸还原酶活性测定的方法。 二、实验原理 植物吸收的硝酸根离子，首先通过硝酸还原酶的催化，被还原成亚硝酸根离子。其反应如下： NO3-+NADH+H+ → NO2-+NAD++H2O 产生的亚硝酸根离子可以从组织内渗到外界溶液中，测定反应液中亚硝酸含量，通过一定公式计算就可得硝酸还原酶活性的大小。 亚硝酸离子的测定用比色法。其反应如下： 对氨基苯磺酸(或磺胺)+2H++NO2- → 叠氮化合物 叠氮化合物+α-萘胺（或盐酸萘乙二胺） → 偶氮化合物(红色) 生成的红色偶氮化合物在520nm波长比色，其光密度值与NO2-含量成正比。 二、实验材料 待测植物组织 三、方法步骤 1．绘制标准曲线： 3 2 2 0.4 0.6 5 4 2 2 0.2 0.8 6 5 2 1 0.5 0 每管含NaNO2的微克数 2 2 2 2 2 盐酸萘乙二胺(或α-萘胺) 2 2 2 2 2 对氨基苯磺酸(或磺胺) 0 0.6 0.8 0.9 1 蒸馏水 1 0.4 0.2 0.1 0 NaNO2标准液(5微克／ml) 7 4 3 2 1 试剂（ml） 试管号 2. 取样 按下式计算酶活性： 3. NaNO2 含量测定 五、实验结果 查表值×(46/69) 材料鲜重（g）×反应时间 NR活性（gNO2-/gFW·h）＝ 六、思考题 1.NR活性测定时取材前为什么要进行一段时间光合作用？ 2.测定酶促反应时为什么要在暗处保温？ 3.NR活性测定时加入磺胺、盐酸萘乙二胺和KNO3的作用各是什么？ * * * *
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