菌种的生产与保藏案例.ppt

⑴ 配方 ⑵ 配制方法（以PDA为例） 马铃薯（去皮、去芽眼）→切成片→称取200g＋1000mL H2O→煮沸→双层纱布过滤→取滤液并补足1000mL＋琼脂→熔化＋其它营养物质→调节pH（用HCl或NaOH）→分装试管→灭菌（高压蒸气灭菌15-30min）→制成斜面→检查灭菌效果（即28~30℃培养2~3d） 其它天然培养基或综合培养基，如：玉米粉、黄豆粉、胡萝卜、麸皮等原料，加适量水煮汁过滤，取滤液与其它成分混合。 二 母种生产技术 2、母种分离 母种分离方法 孢子分离 组织分离 基质分离 有性 无性 ⑴孢子分离法 利用孢子在适宜培养基上形成菌丝来获得纯菌种的方法。 孢子分离法 1）单孢子分离法：培养基上只接种1个担孢子，使它萌发成菌丝体而获得纯菌种的方法。 如：双孢蘑菇、草菇单个孢子分离得到菌丝便能结实。 （一个孢子→萌发→菌丝体→纯种） 2）多孢子分离法：许多孢子接种于同一培养基上，使它们萌发自由交配来获得纯菌种的方法。如：香菇、平菇、金针菇、毛木耳等。 （多个孢子→萌发→菌丝体→纯种） 二 母种生产技术 下面先解释二个基本概念 1）同宗配合：同一担子孢子萌发产生的两条菌丝之间进行结合便能生育（自交亲合、可孕，类似于高等植物自花授粉），可用单孢子分离。 如：双孢蘑菇、草菇 2）异宗配合：同一性别菌丝之间不亲合，只有两条性别不同的菌丝交配才能产生子实体。 大多数食用菌属此类型，需用多孢子分离法。 二 母种生产技术 担子菌亚门中，约10%菌类属同宗结合，90%以上是异宗配合，所以单孢子分离对大多数食用菌不适用，只有育种时才采用。 此法技术复杂，生产上很少采用，在此不作详述。 二 母种生产技术 多孢子分离简单易行，生产上经常采用，多孢子分离的具体操作方法有以下几种： ①整菇插种法：伞菌常用此法采得孢子。 即选择成熟度适当的优良种菇，在无菌操作下，插入无菌孢子采集器内，置适温下让其自然弹散孢子。用接种环取少量孢子，放入试管斜面上培养。 种菇选择：菌丝生长健壮，无病虫杂菌，出菇均匀，转潮较快，菇形圆整，菌盖肥厚，达八九成熟。 参见P48 二 母种生产技术 孢子采集器是用来采集食用菌孢子的一种装置。 孢子采集器 搪瓷盘（大号培养皿） 培养皿 种菇支架 玻璃钟罩（大漏斗） 参见P48 ②悬钓法 此法主要用于耳类（黑木耳、毛木耳、银耳等）孢子的采集。 耳片（表面消毒） → 悬挂于培养基上方→培养→ →取出挂钩与耳片→培养→挑取先端菌丝→转管纯化→母种? 12~24h 培养基 耳片 参见P48 组织分离：指通过菇体组织分离纯种。 优点：操作简便、取材广泛、不易变异，保持原菌种优良种性。 方法： ①选择种菇（出菇早、无病虫害、柄短、肉厚、大小适中、5~6分成熟） ②组织分离 ⑵组织分离法 参见P45 选择种菇→表面消毒（75%酒精或0.1%升汞）→撕成两半→取菌柄菌盖交界处→小块菌肉→移入PDA→培养→观察→转管→纯种 上述分离物在25℃下，经3d~5d可看到分离物表面长出白色绒毛状丝，每隔1d~2d检查1次，随时淘汰霉菌、细菌污染的培养物，培养10d~15d，再作1次转管即得到纯种。 ⑵组织分离法 参见P45-46 注： ⑴取组织块不要贪大，因组织块小易定植; ⑵有些食用菌不易用组织分离法获纯种； ⑶不同的食用菌切取部位和消毒方法不同。 如：1）红菇、乳菇等，因它们菇体细胞已泡囊化，再生能力极弱； 又如：2）银耳和木耳等胶质菌，它们子实体中菌丝含量极少，组织分离法不易成功。而只能取其生长的基质即菇木、耳木分离。 ⑵组织分离法 概念： 由菇木、耳木、培养料等食用菌生长基质中的菌丝分离培养而成。这是利用潜在于寄主组织内的菌丝体获得纯种的方法。 （常用于银耳及木耳菌种分离） ⑶基内菌丝分离法（基质分离法） 参见P46-47 段木内菌丝分离法： 取1~2cm菇木、耳木（子实体着生部位）→去皮→消毒（75%酒精或0.1%升汞浸泡1min）→切去四周木块→切成火柴杆粗细，0.5 cm长的小木梗→取1根放入试管斜面上→培养→取菌丝→转管纯化 ⑶基内菌丝分离法（基质分离法） 参见P46-47 母 种 二 母种生产技术 3、菌种提纯与扩大繁殖 用孢子、组织或基质分离法得到的菌种，一般不宜直接用于生产，必须经过提纯方可应用。 ⑴提纯：选稀疏单菌落→边缘取菌→接种试管斜面（3~5支）→培养→纯菌种。 ⑵扩大繁殖：提纯的母种或从有关单位引进的母种，数量均很少，应扩大繁殖后再用。 在母种繁殖时，最好一次多移些，不易多次转管，以免影响出菇率，降低产量和质量。 一支斜面母种可移接40支左右斜面试管。 4、质量检验 对分离、引进或转管扩大的菌种，应经过质量鉴定，选