药敏与耐药详解.pptVIP

药敏与耐药 疑问： 1、为什么天然耐药的药物会检测出敏感？ 2、铜绿假单胞菌敏感的标准是什么？ 3、为什么铜绿对替加环素天然耐药？ 4、有什么因素可以影响这个结果？这个结果可信吗？ 目录 什么是细菌培养 细菌培养：细菌培养是一种用人工方法使细菌生长繁殖的技术。细菌在自然界中分布极广，数量大，种类多，它可以造福人类，也可以成为致病的原因。大多数细菌可用人工方法培养，即将其接种于培养基上，使其生长繁殖。培养出来的细菌用于研究、鉴定和应用。细菌培养是一个复杂的技术。 细菌培养仪器 药敏试验方法--抑菌圈 在涂有细菌的琼脂平板上，抗菌药物在琼脂内向四周扩散，其浓度呈梯度递减，因此在纸片周围一定距离内的细菌生长受到抑制。过夜培养后形成一个抑菌圈，抑菌圈越大，说明该菌对此药敏感性越大，反之越小，若无抑菌圈，则说明该菌对此药具有耐药性。其直径大小与药物浓度、划线细菌浓度有直接关系。 抑菌圈 结果判断和报告 用精确度为1mm的游标卡尺量取抑菌圈直径。根据NCCLS标准，作出“敏感”、“耐药”和“中介”的判断。 药敏试验方法：MIC MIC测定 不同的药敏试验方法，针对不同药物，可靠性不一样。所以对不同的细菌、药物都有明确标准及培养基质控标准。 铜绿假单胞菌的抑菌圈和MIC标准 铜绿假单胞菌 抑菌圈直径及 MIC 解释标准 没有四环素（包括替加环素类），余抗生素MIC最高的标准是=2ug/ml 来源于：CLSI抗微生物药物敏感性试验的执行标准 质控范围 质控菌株在质控范围内来确定培养基质量 目录 耐药性 又称抗药性，系指微生物、寄生虫以及肿瘤细胞对于药物作用的耐受性，耐药性一旦产生，药物的作用就明显下降。耐药性根据其发生原因可分为获得耐药性和天然耐药性。自然界中的病原体，如细菌的某一株也可存在天然耐药性。 细菌主要通过以下5种方式对抗菌药物产生耐药： （1） 产生灭活酶或钝化酶， 将抗菌药物转化为无活性的代谢物； （2） 改变靶位结构，使抗菌药物可作用靶位的数量减少； （3） 降低细胞膜的通透性， 减少抗菌药物的进入； （4） 产生生物被膜， 抵御抗菌药物的杀伤； （5） 当药物进入细胞后， 以上这些屏障并不能阻止抗菌药物产生毒性作用， 所以有效地向细胞外泵出药物是细菌对抗菌药物产生耐药的重要方式 膜微孔蛋白缺失 铜绿假单胞菌产生几种和天然耐药有关的蛋白通道， 主要的通道是 OPrF，大多数分子能穿过 OprF，但实际上并不是很多分子穿过 OprF 通道。 有文献显示， 缺失 OprF 通道并没有使细菌不产生耐药。铜绿假单胞菌上的特殊通道还包括:OprB(糖蛋白特殊通道)、OprP(磷酸盐特殊通道)、 OprO(多聚磷酸盐特殊通道)、OprD(带正电荷的氨基酸特殊通道)。目前已经清楚， 亚胺培南和其他碳青霉烯类通过孔蛋白 OprD 穿过细胞膜， 而其他 β 内酰胺类不能利用 OprD， 蛋白的缺失增加了碳青霉烯类的耐药性 钝化酶产生 主要包括 β 内酰胺酶及氨基糖甙类钝化酶， 大多数酶是铜绿假单胞菌由质粒编码从外界获得的。β 内酰胺酶主要包括 AmpC 酶、超广谱 β 内酰胺酶(ESBLs)及金属酶(MBL)， AmpC是一种由染色体编码的钝化酶， 其编码 β 内酰胺酶， β 内酰胺酶能够破坏 β 内酰胺环， 从而使 β 内酰胺类抗生素丧失结合位点。AmpC 酶的产生使铜绿假单胞菌对除碳青霉烯类以外的所有 β 内酰胺类产生耐药。氨基糖苷类钝化酶能导致药物不易进入菌体内， 也不易与细菌内靶位(核糖体 30s 亚基)结合， 从而失去抑制蛋白质合成的能力 主动外排泵 就是拥有将药物泵出细胞的外排泵。 铜绿假单胞菌外排泵是一种质子泵， 可将多种药物泵出细胞并参与生物被膜形成，从而产生多重耐药这些外排泵引起铜绿假单胞菌对大环内酯类、 β 内酰胺类、 氟喹诺酮类和氨基糖苷类抗生素耐药， 只有多黏菌素类药物不能通过外排泵泵出体外。MexXY- OprM 是近来研究最多的一类多重主动外排泵系统， 它除了能泵出喹诺酮类药物， 还能泵出氨基糖甙类、 四环素类药物。在临床分离的耐药株中， 已发现主动外排机制与Ⅱ型拓扑异构酶突变共同存在， 而多种耐药机制在同一菌株中同时存在， 容易产生菌株对药物的高耐药性。 铜绿其他的耐药机制 还有一些机制： 基因原件的转移 耐药基因的突变 β-酰胺酶 膜通透性的减低 生物膜形成 铜绿--替加 铜绿假单胞菌对替加环素天然耐药， 其细胞膜上的主动外排系统是重要因素。根据全基因组序列分析， 推测铜绿假单胞菌至少有12种主动外排泵， 到目前为止已发现了7种， 其中MexX