总胆固醇(TCH) 终点法.doc

项 目 总胆固醇（TCH） 方 法 终点法 目 录 1. 检测原理 2. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 2.2 静脉采血：。 2.3 抗凝剂： 2.4 标本处理： 3．试剂 3.1 试剂： 3.2校准血清： 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 4．仪器 5．操作 6．计算 7．操作性能 7.1 精密度： 7.2 准确度： 7.3 灵敏度： 7.4 可报告范围： 7.5 特异性： 7.6 干扰： 8．参考值 9．临床意义 附录A: 参数 1. 检测原理 酯化的胆固醇经酶水解后，经胆固醇氧化酶氧化，所产生的H2O2与 4-氨基安替 比林和苯酚反应生成醌亚胺。醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与 胆固醇含量成正比。 胆固醇酯酶 胆固醇酯 + H2O 胆固醇氧化酶 胆固醇 + O2 过氧化物酶 H2O2 + 4-氨基安替比林 + 苯酚 3. 标本采集与处理 2.1 受检者的准备： 病人空腹12h，不饮酒24h后采集血样。体检对象抽血前应有两周的的正常状况记录。妊娠后期各项血脂都会增高，应在产后或中哺乳后3个月检验才能反应其基本血脂水平。注意有无应用影响血脂的药物，如降血脂药、避孕药等。此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为血脂水平有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验，应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。 2.2 静脉采血： 除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。在采血前至少应静坐5分钟，一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过1分钟，穿刺成功后立即松开止血带。 2.3 抗凝剂： 血浆使用EDTANa2（1mg/mL）抗凝。 2.4 标本处理： 血标本室温放置30min～45min后离心分离血清或血浆，在两小时内检测完毕；如两小时内不能检测完毕，将离心分离血清或血浆置洁净试管加盖2-8保存。 3．试剂 3.1 试剂：本科适用湖南永和阳光科技有限责任公司TCH试剂盒，为液体单一试剂，各组分如下： 组 成 浓 度 缓冲液 30mmol/L pH 6.5±0.2 4-氨基安替比林 0.25mmol/L 胆固醇酯酶 150U/L 胆固醇氧化酶 100U/L 过氧化物酶 5000U/L 苯酚 25mmol/L 叠氮钠 0.01% 胆固醇标准液 200mg/dL 5.17mmol/L 3.2：校准血清 使用湖南永和阳光科技有限责任公司提供的40项校准血清。 校准频次： 空白定标：每日需做试剂空白定标。 全点定标：试剂换批号使用时或质控结果超过规定的2SD范围，需要全点定标。 3.3 试剂与校准血清的稳定性： 原包装试剂储存在2-8至标签所示失效日期。试剂开瓶后，在仪器中至少可保存30天。 试剂储存在18-22稳定28天，试剂应避免污染。试剂颜色为无色至浅红色透明，当试剂变色或者在546NM的吸光度高于0.15ABS，按照试剂失效处理。 多项校准血清在2-8储存至标签所示失效日期，复溶后-20保存，可稳定一个月，只可冻融一次，避免反复冻融。参见校准血清说明书。 试剂盒配备的水标准液在2-8储存至标签所示失效日期，开瓶后2-8储存避免污染，可稳定2个月。 4．仪器 KONELAB 30型号仪器。 性能：波长520nm，仪器测定吸光度的灵敏度应达到0.001ABS以上。 5．操作 样品为血清或肝素/EDTA抗凝血浆。本法为终点法。参数见后附，附录A。 试剂参数设置、定标操作以及样本检测常规操作，见仪器操作规程。 6．计算 A测定 C ———— × C0 A标准 式中：c—— 测定血清总胆固醇浓度，mmol/L； A测定—— 标本管吸光度； A标准—— 标准管吸光度； CO—— 校准血清中总胆固醇浓度，mmol/L； 7．操作性能 7.1 精密度： 批内CV 0.56%，批间CV 2.31%。 7.2 准确度： 检测结果的相对不准确度≤±10%。 7.3 灵敏度： 总胆固醇为2mmol/L时, 显色吸光度A520nm为：0.141-0.186。 7.4 可报告范围： 血清与试剂用量之比为1:100时，测定上限为19.3mmol/L。 7.5 特异性： 测量值在给定值的90%-110％范围内。 7.6 干扰： 内源性干扰物溶血为1000mg/ml、脂血2000mg/ml、黄疸30mg/ml、抗坏血酸200mg/ml对测试结果无明显影响。 8．参考值 5.17mmol/L（200mg/dl） 9．临床意义 检测血清中胆固醇的含量，主要用于辅助诊断高血脂症。胆固醇的含量和动脉 粥样硬化有一定关联。 附录A: 参数