生物分离初级分离资料.pptVIP

体系的温度只需控制在室温条件下； 沉淀的颗粒较大，产物易收集；PEG非但不会使大多数蛋白质变性，且可提高其稳定性。 优点 缺点 PEG难从蛋白质溶液中除去。 聚电解质是含有重复离子化基团的水溶性聚合物，可用于蛋白质沉淀的聚电解质有聚丙烯酸、聚乙烯亚胺、羧甲基纤维素和离子型多糖如肝素等。 机理：蛋白质分子的相反电荷与聚电解质结合，形成一个多分子络合物，类似于絮凝，起架桥作用，当络合物超过游离蛋白质的溶解度极限值时，就发生沉淀。另外，还有盐析和降低水化程度的作用。 5、聚电解质沉淀法 1. 能与羧基、胺基等含氮化合物以及含氮杂环化合物强烈结合的金属离子，如：Mn2+、Fe2+、Co2+、Ni2+、Cu2+、Zn2+、Cd2+； 6、金属沉淀法 沉淀机理：金属离子与蛋白质分子中的特殊部位起反应造成的。 金属离子沉淀蛋白质可分为三类： 2. 能与羧酸结合而不与含氮化合物结合的金属离子，如：Ca2+、Ba2+、Mg2+、Pb2+； 3. 与巯基化合物强烈结合的金属离子，如：Hg2+、Ag+、Pb2+。 实际使用时，金属离子的浓度常为0.02 mol/L。 7、其它沉淀方法——  （1）亲和沉淀 亲和沉淀是利用蛋白质与特定的生物的或合成的分子(免疫配位体、基质、辅酶等)之间高度专一性的相互作用而设计出来的一种特殊选择性的分离技术。该方法提供了一个从复杂混合物中分离提取出单一产品的有效方法。 其沉淀原理不是依据蛋白质溶解度的差异，而是依据“吸附”有特殊蛋白质的聚合物的溶解度的大小。 初始阶段：将一个目标蛋白质与键合在可溶性载体上的亲和配体络合成沉淀； 所得沉淀物用一种适当的缓冲溶液进行洗涤，洗去可能存在的杂质； 用一种适当的试剂将目标蛋白质从配体中离解出来。 该技术的三个步骤： 2.选择性变性沉淀法 选择一定的条件使溶液中存在的某些杂蛋白等杂质变性沉淀下来，而与目的物分开，这种分离方法就称为选择性变性沉淀法。 3.选择性溶剂沉淀法 核酸的沉淀分离，可以选择适宜的溶剂进行处理，使蛋白质等杂质变性沉淀而获得核酸，这种方法又称为选择性溶剂沉淀法。 选择沉淀方法的依据 选择沉淀方法时，应从以下几方面综合考虑： 沉淀剂是否会引起蛋白质分子破坏； 沉淀剂本身的性质； 沉淀操作的成本、难易程度； 残留沉淀剂的去除难度，最终产品的产率及纯度的要求等。 二、泡沫分离 泡沫分离又称泡沫吸附分离技术。 泡沫分离原理 泡沫分离过程是利用待分离物质本身具有表面活性(如表面活性剂)或能与表面活性剂通过化学的、物理的力结合在一起(如金属离子、有机化合物、蛋白质和酶等)，在鼓泡塔中被吸附在气泡表面，得以富集，藉气泡上升带出溶剂主体，达到净化主体液、浓缩待分离物质的目的。分离作用主要取决于组分在气－液界面上吸附的选择性和程度，其本质是各种物质在溶液中表面活性的差异。 泡沫分离法的分类 泡沫分离是以气泡为介质，利用组分的表面活性差进行分离的一种分离方法 无泡沫分离是指用鼓泡进行分离，但不一定形成泡沫层，可分鼓泡分馏和溶媒浮选。 泡沫分离按分离对象是溶液还是含有固体离子的悬浮液、胶体溶液而分成泡沫分馏和泡沫浮选 。 泡沫浮选用于分离不溶解的物质，按照被分离对象是分子还是胶体，是大颗粒还是小颗粒等等，又可分为: 1 矿物浮选，用于矿石和脉石离子的分离； 2 粗粒浮选和微粒浮选，常用于共生矿中单质的分离，前者粒子直径大致1～10mm内，后者的粒子直径为1μm ～1mm ，处理的对象为胶体、高分子物质或矿浆； 3 粒子浮选和分子浮选，用于分离非表面活性粒子或分子，需要向体系中加入浮选捕集剂与被分离组分形成难溶或不溶物，然后以浮渣形式将其脱除； 4 沉淀浮选，首先利用改变溶液的pH值或加入某种絮凝剂等方法，使需脱除的粒子形成沉淀，再利用浮选法将沉淀脱除； 5 吸附胶体浮选，是以胶体粒子作为捕集剂，选择性吸附所需的溶质，再用浮选法除去。 泡沫分离技术除了在选矿方面比较成熟外。在其他方面尚属开发阶段，命名和分类尚不完善，但由上所述，可以对泡沫分离技术有大体的了解。 影响泡沫分离的因素 A．待分离物质的种类 B．溶液的pH值 C. 表面活性剂浓度 D．温度 E．气流速度 F．离子强度 谢 谢 早在1859年，中性盐盐析法就被用于从血液中分离蛋白质，随后又在尿蛋白、血浆蛋白等的分离和分级中使用，得到了比较满意的结果。 在蛋白质溶液中加入中性盐后会压缩扩散双电层、降低ζ电位，即中性盐既会使蛋白质脱水，又会中和蛋白质所带电荷，使颗粒间的相互排斥力失去，在布朗运动的互相碰撞下，蛋白质分子结合成聚集物而沉淀析出。 初级分离 生物分离的一般流程 原料液 细胞分离(离