第3章工艺研究.jsp-副本分析.ppt

例1.酶法裂解生产6-APA * 青霉素酰化酶由于作用底物不同而分为青霉素G酰化酶、青霉素V酰化酶、氨苄青霉素酰化酶三种，它们分别存在于不同的细菌中。 与医药工业密切相关的有：药用酶抑制剂、酶诊断试剂、以及作为催化剂的工程酶。 * 3.6 酶催化（微生物催化） 酶及固定化酶已大量应用于外消旋体的光学拆分和废水处理； 酶催化技术在半合成抗生素工业、氨基酸工业、甾体药物合成上已得到广泛的应用。 酶是一种活性蛋白，具有变性，常因变性而降低活性，甚至失活(inactivation)。 * 3.6.1 酶的特性 酶的变性多数是不可逆的，比如变性后的蛋白质不溶于水。 酶是两性化合物，即能与酸、碱相结合，具有蛋白质所特有的等电点（正、负电相等、处于电中性、在电场中不移动的PH值）。此时其溶解度最小，多数酶可溶于稀盐和稀醇水溶液，酶催化反应可在水溶液中进行。 引起变性的原因有物理的和化学的两种 * 3.6.1 酶的特性 影响酶活性的主要因素是热（温度）、酸碱度（PH值）和氧化等三方面。 化学原因：酸、碱、丙酮、乙醇、尿素、表面活性剂、重金属盐或氧化剂（包括空气中的氧）等化学试剂的作用。 物理原因：热、压力、紫外线、X射线、声波、振动和冻结、不同界面处的吸附作用等； * 热（温度）影响 不同温度下酶反应速度（初速度）如下： a)反应有最适温度，超过这一温度，反应速度急剧下降，酶蛋白变性。 b) 即使最适温度，也不可避免会有不同程度的热失活。 c)多数酶的最适温度为30～40℃。 * 热（温度）影响 ② 不同PH条件下酶活性 a) PH值极高或极低时蛋白质会变性； b) PH值对酶及底物带电状态的影响； c) 各种酶的最适PH接近于它在活体内所处的PH值。大多数酶的最适PH为5.0—9.0,但胃蛋白酶的最适PH为1.8。 巯基是某些酶特别是氧化还原酶活性的必需基团。 * ③ 氧化 多数氧化剂，包括空气中分子氧，可使这类酶（称为巯基酶）常因分子中的巯基形成架桥S—S键而失活。 在使用和保存这类酶时必须予以特别注意。 (1) 有高催化活性，催化效率高； * 3.6.2 酶催化反应的特点 例1.一分子过氧化氢酶（马肝），在一分钟内能将五百万分子过氧化氢分子分解成水和氧，催化效率是Fe的1010倍。 例2. 1g结晶的α-淀粉酶，在65分钟内，可使2吨淀粉转化成糊精。 (2) 酶的催化作用具有高度的专一性（即专一性强） * 对作用底物（被作用物）有严格选择性，一种酶只能催化特定的一类或一种物质。 例4. 淀粉酶只能催化淀粉水解；蛋白酶只能催化蛋白质水解。 例5. 尿素分子中的氨基上的氢原子被甲基取代，便不能为尿酶所分解。 (4) 一般酶本身无毒，反应过程也不产生有毒物质; * (3) 反应条件温和 酶催化反应一般在常温常压下进行。而一般催化反应往往要求高温、高压、强酸或强碱等条件。 (5) 酶的活性可调控 * 控制酶的生成和降解； 调节修饰酶的某些共价结构，从而影响酶的活性； 通过酶原的激活，来调节酶的活性； 通过同功酶、多酶复合体来调节和控制酶的活性。 (6) 缺点； * 1)易发生杂菌感染； 2)价格高，精制困难； 3)仅限于一步或二步简单的反应； 4)适用底物范围小； 5)容易由于各种原因失活，稳定性差。 3.6.3 酶催化反应的影响因素 * (1) 温度——大多数酶适宜的反应温度为40 －60℃,不同酶的温度要求不一样。 (2) 抑制剂和激活剂对酶催化有很大影响 * ① 酶抑制剂——对酶的催化能力有抑制、减弱、甚至破坏的物质，如重金属Ag+、Hg2+、Cu2+、硫化物、生物碱、酶催化产物等。 ② 激活剂——能加强酶作用和提高酶活性的物质，如：K+、Na＋、Mg2＋、Ca2＋、Zn2＋、Mn2＋、F－、Cl-、SO42- 等。 酶固定技术研究始于1916年，50年代也有过报道，但未引起人们的重视。 * 3.6.4 固定化酶及其性质 60年代后Katchnski为首的研究小组对于酶的固定化方法、固定化酶的理化性质进行了开创性的研究。 1969年日本千一郎成功将固定化氨基酸酰化酶应用于DL-氨基酸拆分上，实现了连续化工业生产。 最初主要是将水溶性酶与不溶性载体结合起来，成为不溶于水的酶衍生物。 * 70年代后固定化技术迅速发展，目前，已成为制药工业中酶催化技术的重要发展方向。 (1)酶催化在生产中常遇到的问题 * 酶可以溶液酶的形式利用，反应系统为单相反应系统，在生产中会遇到下列问题： 1) 对酸、碱、温度、有机溶剂等不稳定，有的甚至