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酶法评价鸡饲料营养价值的方法学研究进展 2010.02 27 对于畜禽养殖业而言，饲料营养价值评定意义重大，饲料营养 价值评定的准确性对满足动物营养需要、为动物提供精确营养、提 高养殖效益意义重大，而其中选择合适的评定方法是提高准确性的 决定因素。 饲料营养价值评定方法主要包括化学分析法、动物消化代谢试 验、体外酶法等。化学分析法快速、简便，重复性高，但所测定的结 果不足以准确反映饲料营养物质在动物体内的利用率；动物消化代谢 试验法结果与动物实际情况接近，符合程度高，但耗时、费力，很难 对饲料样品进行快速分析；应用仿生学原理建立的酶法由于吸收了前 两种方法优点 (Uden，1992) [1] ，重复性高、速度快、结果准确，因此 得到越来越多研究者重视。 鸡的基础代谢旺盛，生长周期短，生产力高，必需供给高营养水 平的日粮以保证维持和生产需要，所以研究鸡用饲料原料营养价值评 定方法意义重大。 1 酶法的分类 酶法的定义为根据动物体内酶的性质、种类、酶的作用条件（如 温度、pH 值、水分等）、胃肠道的蠕动及营养物质的吸收等条件设计 生物反应器，进行体外模拟饲料营养物质消化吸收过程的试验方法。 酶评定饲料营养价值的方法分为两类。 1.1 单酶评定法 该方法是主要利用胃蛋白酶在体外进行模拟消化评定饲料营养 价值的一种方法，将饲料在酸性（HCl）液体环境中，加入一定活性 的胃蛋白酶，在恒温条件下模拟胃消化过程进行反应。此法只适合对 饲料中蛋白质一种养分的营养价值和体内消化率进行评价和预测。 酶法评价鸡饲料营养价值 的方法学研究进展 河北农业大学动物科技学院 / 梅学文 陈宝江 许 晴 中国农业科学院饲料研究所 / 于会民 2010.02 272010.02 28 Pedersen(1983) [2] 建立了一套保持 pH 值恒定不变单酶法预测蛋白质体 内消化率的操作程序，并利用该方法分别预测了 31 种植物性蛋白质 饲料和 11 种动物性蛋白质饲料的体内消化率，相关性分别为 r=0.85 和 0.92。研究表明，在一定范围内，通过测定蛋白质水解程度来预 测饲料蛋白质体内消化率是可信的。利用单酶法评定蛋白质饲料时， 饲料品质易受饲料粒度和胃蛋白酶剂量等因素的影响，且胃蛋白酶活 性高低直接对该方法的可靠性产生影响。 1.2 多酶评定法 饲料养分在动物消化道内的消化过程，不是由某种单一消化酶 独立完成，因此必须对动物消化道内的各种环境条件进行有效模拟， 所预测的结果才能与体内情况更为接近。随着对畜禽消化生理的深 入研究，酶消化模拟技术由过去的单一酶法发展为现在的多酶法， 多酶法不但对胃消化过程进行模拟，而且还对小肠消化以及大肠消 化等过程进行模拟。不仅增加了酶的数量还增加了消化产物的分离 技术。 多酶法根据模拟消化部位的不同又分为两步酶解法和三步酶 解法。两步酶解法即模拟胃 - 小肠两部分的消化，先用胃蛋白酶 进行消化，然后用肠液或胰酶进行消化，消化结束后利用离心或 过滤的方法将已消化养分和未消化养分进行分离 (Buchmann 等， 1979) [3] ，此方法分离出来的蛋白质消化产物分子量通常偏大或偏小 (Gauthier,1982) [4] 。为了克服消化产物累积对酶促反应的抑制作用， Cave(1988) [5] 利用半透膜去除消化产物，发现去除消化产物可以提高 体内与体外养分消化率的相关性，Maurn(1955) [6] 建立了连续透析法， 将小肠消化过程放在透析袋内进行，并将透析袋浸泡在 pH 呈中性 的缓冲液中，使消化产物不断从透析袋内透析出来进入缓冲液。该 方法明显降低了消化产物积累对水解反应的抑制作用，提高了饲料 养分酶解消化率。Drake（1991) [7] 对透析袋截流分子量的大小及透析 时间等对日粮营养酶解消化率的影响作了研究。研究表明：透析袋 的截留分子量是影响酶解消化率的主要因素。三步酶解法，即胃消化、 小肠消化、大肠消化，该方法在两步酶解法的基础上增加了瘤胃液 或碳水化合物酶。Boisen 和 Femandez(1997) [8] 研究表明：三步酶解 法可以用来评定单胃动物日粮的消化能。 2 酶法建立的理论依据 营养物质在鸡消化道内主要经过物理降解和化学降解，微生物在 鸡饲料营养物质的消化中不起直接作用，它主要是通过改变肠道形态 来提高营养物质的消化 ( 呙于明，2004) [9] ，而酶的降解占化学降解的 主导地位。 不同品种鸡对营养物质消化率不同，如固始鸡与蛋鸡、肉鸡对日 粮粗蛋白质表观利用率相似，测定其消化道胰蛋白酶活性，发现活性 相近；粗脂肪表观利用率则由于胰腺和食糜 中脂肪酶活性差异较大而相差显著 [10] ；袁建 敏 (2001) [11] 等比较肉仔鸡与蛋公鸡蛋白消化 酶活性和饲料氨基酸消化率后，证