实验三、氨基酸纸层析.pptVIP

氨基酸纸层析 [实验目的] 掌握纸层析的一般原理和操作方法。 了解氨基酸的特征性颜色反应。 学会分析未知样品的氨基酸成分。 [实验原理] 纸层析是以纸作为惰性支持物的分配层析，纸纤维上的羟基具有亲水性，能吸附一层水作为固定相，而有机溶剂作为流动相，由于不同组分在两个互不相溶的溶剂中的分配系数不同，故当流动相流经支持物时与固定相之间不断地连续抽提使组分在两相间不断分配而得到分离。 溶质组分在纸上的移动速率，即组分分离后在图谱上的位置用Rf值表示。 影响 Rf 值的因素： ① 被分离物质的极性；溶剂的极性 ② pH：展层剂的 pH 影响被分离物质的极性基团的解离形式 酸性氨基酸（如Glu、Asp）在酸性条件下所带的净电荷比碱性条件时少，而碱性氨基酸（如Lys、Arg）则与此相反。 借此性质用酸相和碱相展开剂进行双向层析，可使酸碱性不同的氨基酸得到分离。 溶剂的 pH 还可影响有机溶剂（流动相）的含水量 —— 溶剂酸性大，含水量就多 —— 影响 Rf 值。 ③ 滤纸的质量（密度，含 Ca2+、Mg2+、Cu2+ 等杂质… 器材： ①层析缸 ②毛细管 ③培养皿 ④层析滤纸 ⑤ 电吹风机 试剂： ①酸向展开剂： 正丁醇:80％甲酸:水＝15:3:2（含0.1%茚三酮） ②标准氨基酸溶液（1mg/ml）： 分别称取赖氨酸、脯氨酸、缬氨酸、苏