第三章用于基因克隆的载体分解.ppt

第三章 用于基因克隆的载体 3.5.2 噬菌粒（phagemid or phasmid） 噬菌粒载体的特点： 噬菌粒是一类人工构建的含有单链噬菌体包装序列、复制子以及质粒复制子、克隆位点、标记基因的特殊类型的载体 能像M13-DNA那样体外包装，并高效转染受体细胞 装载量比常规的M13mp系列要大很多（10 kb） 能像质粒那样在受体细胞中自主复制 重组操作简便，筛选容易 通过克隆双链DNA能获得同等长度的单一单链DNA ?噬菌体感染细菌的早期：双链进行?型复制。 3.3.2 ?DNA的复制 模型 （1） ?型复制 （2）滚环复制 感染的晚期：启动滚环复制机制。 形成多联体?DAN分子。 这种多联体分子必须在cos位点被切断成单体分子才能被包装起来。 （1）构建原理： 3.3.3. ?噬菌体载体的构建 （2）构建过程 ①在这个非必须区内制造限制酶切点 ②引进某些突变表型，作为选择标记 ③突变某些基因，使它成为安全载体 ④删除?DNA必须区段上常用的限制酶切点 删除?噬菌体的非必需区，留出插入空间。 （3）人工构建的?噬菌体载体有两种类型： ① 插入型载体（insertion vectors)： 如 ?gt10、?gt11、?BV2、?NM540、?NM1590、?NM607 1）免疫功能失活型： 插入位点位于载体合成活性阻遏物区域（cI基因）内。 EcoR I cI