高中生物奥赛辅导生化——核酸课稿.ppt

* 一定条件下(相对较短的核酸分子)，Tm值大小还与核酸分子的长度有关，核酸分子越长，Tm值越大；另外，溶液的离子强度较低时，Tm值较低，融点范围也较宽，反之亦然，因此DNA制剂不应保存在离子强度过低的溶液中。 * 為何 每種 DNA 的 Tm 都不一定相同？ 因為兩股間吸引力大的，其 Tm 會比較高；而兩股間的吸引力為何有大小之別？ 那是因為兩種鹼基對中，AT 之間只有兩個氫鍵，而 CG 間有三個氫鍵，因此 GC 含量越多的 DNA，Tm 就越大。 * 除了 GC 含量會影響 Tm 外，溶液中的離子濃度也有很大影響。 若溶液的離子濃度低，則 DNA 的 Tm 也會降低；因離子可中和兩股 DNA 分子上的強大負電基團 (磷酸)，若離子濃度太低，則兩股磷酸負電無法有效中和，因而造成互斥致使 Tm 下降。因此，請注意在做實驗時，不要把 DNA 溶在純水中，沒有離子的中和，兩股 DNA 可能會互斥，造成變性而沈澱。RNA 則無此問題，為什麼？ * DNA片段越大，复性越慢； DNA浓度越大，复性越快。 * 若 把各種生物的基因體取出，經變性分開兩股後，再慢慢降溫復性，則可發現各種生物復性所需要的時間不同；可以預測越複雜的基因，其復性時間越長，上圖結果的確支持此一想法。圖中的 C0t 代表測試核酸的濃度 (C0) 與復性所需時間 (t) 的乘積，通常若核酸濃度固定，則只需考慮時間，因此