妥布霉素经呼吸机进入中老年患者体内后的药物代谢动力学及肺内分布.doc

　　医院感染性肺炎在重症监护病房（ICU）靠呼吸机辅助呼吸的患者中发生率为9%～60%，死亡率为35％〔1〕。这些感染60%是由革兰阴性杆菌引起的。妥布霉素为氨基甙类抗生素，常用于革兰阴性杆菌引起的严重感染〔2〕。但静脉应用妥布霉素渗入到肺薄壁组织的含量低，进入支气管分泌物的更少，极大地影响了疗效。本研究应用高效液相色谱技术〔3，4〕研究了妥布霉素在靠呼吸机辅助呼吸的患者吸入后的体内药物代谢动力学及其吸入后的肺内分布。 　　1 材料与方法 　　1.1 对象 受试者为200名心脏病手术后需要靠呼吸机辅助呼吸的中老年患者和6名胸腺瘤伴重症肌无力（胸肌型）待手术的老年患者，年龄45～80（平均65±8）岁，患者肝、肾功能正常，标准体重，无烟酒嗜好，试验前2 w未用过任何抗生素药物，志愿参加试验。试验前均签署知情同意书。 　　1.2 仪器 美国740呼吸机，日本岛津LC 5A型高效液相色谱仪，包括SPD 2A型紫外检测器，SIL 1A型六通进样阀，C3A型色谱数据处理机。YKH Ⅱ型液体快速混合器，荧光显微镜。色谱条件色谱柱：ZorbaxODS 4.6 mm×250 mm；流动相:乙腈 50 mmol/L磷酸钾缓冲液，pH6.0 35∶65 ；流速:1.5 ml/min。用前过滤和减压脱气；检测波长为220 nm。 　　1.3 试剂 硫酸妥布霉素注射液（国药准字H座机电话号码，西南药业股份有限公司），妥布霉素（标准品，中国生物制品检定所），新霉素（内标，中国生物制品检定所），甲醇、荧光素钠、乙腈、乙醚、碳酸钾、磷酸二氢钾等均为国产分析纯试剂；实验用水为超纯水。 　　1.4 贮备液及标准液 精密称取妥布霉素和新霉素适量，用甲醇配制成100 mg/L的贮备液，于4℃冰箱保存。使用时将妥布霉素贮备液稀释成10～200 μg/L系列浓度的标准液，新霉素贮备液稀释成1 mg/L的内标液。 　　1.5 妥布霉素荧光素钠混悬液的制备 将妥布霉素6.06 mg/kg溶于乙醇溶液中，放置挥发至有部分结晶析出，酒精灯加热使结晶溶解，加入吐温80（占总体积的2％）及荧光素钠，再加入蒸馏水，即得妥布霉素荧光素钠混悬液。 　　1.6 方法 在进行呼吸机辅助呼吸前，将硫酸妥布霉素以6.06 mg/kg注入400 ml蒸馏水中一起注入湿化瓶中，进行辅助呼吸，分别于辅助呼吸后5，15，30，60，180，360，720 min抽血，用高效液相色谱法测定血浆妥布霉素浓度〔5〕。3名胸腺瘤伴重症肌无力 胸肌型）患者在术前进行呼吸机辅助呼吸时，依上述方法使妥布霉素荧光素钠进入患者肺部。在手术时切取一小块（2 cm×2 cm）肺组织，用荧光显微镜观察其肺内分布。试验方案经本院伦理委员会批准。 　　1.7 样品处理方法 　　1.7.1 高效液相色谱法样品处理 取血浆0.5 ml置具塞离心试管中，加入200 μl内标液，1 mol/L pH9.0 硼酸钠缓冲液1 ml充分混合后，加入5 ml乙醚，于液体快速混合器上漩涡混合5 min，3 000 r/min，离心5 min，取乙醚层于40℃水浴中氮气流吹干，残留物用50 μl流动相溶解，进样25 μl作色谱分析。 　　1.7.2 妥布霉素荧光素钠肺组织标本处理 其中两块肺组织，每块肺组织做2张冰冻切片，同时作常规石蜡包埋切片，HE染色以进行对比观察，另一块肺组织做冰冻切片以进行空白对照。荧光显微镜下观察并摄影〔6～8〕。 　　1.8 统计学处理 药时数值在计算机上采用3P87适用药代动力学程序进行拟合，得最佳药时曲线模型，判定妥布霉素吸入后在人体内的药代动力学模型及计算各项药代动力学参数。 　　2 结果 　　2.1 气管内给予妥布霉素不同时间的血药浓度（μg/ml） 在5，15，30，60，180，360和720 min时的妥布霉素血药浓度分别为53.96±6.74、35.99±6.07、25.65±5.16、21.02±4.51、15.42±3.68、11.65±2.35和7.43±1.34。 　　图1 吸入4 d后妥布霉素荧光素钠在肺泡内的沉积（略） 　　2.2 预防和治疗医院感染性肺炎效果 206例病人住院期间无1例发生医院感染性肺炎。 　　2.3 妥布霉素荧光素钠在肺泡内的沉积 吸入4 d后妥布霉素荧光素钠在肺泡内均匀沉积，见图1。 　　3 讨论 　　妥布霉素静脉给药后仅有少量药物能进入肺组织，所以临床上用其治疗医院感染性肺炎效果不佳。本研究中的206例病人住院期间无1例发生医院感染性肺炎。我们运用了高效液相色谱和免疫荧光技术研究了妥布霉素吸入后的体内药物代谢动力学以及肺内分布。吸入后妥布霉素药物浓度首先在肺组织内增高达到峰值并持续一定时间，然后再逐渐扩散到