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* 酶联免疫吸附试验 （Enzyme Linked Immunosorbsent Assay,ELISA） * 免疫标记技术 将已知抗体或抗原标记上易示踪物质（如酶、荧光素、放射性同位素、胶体金等），通过检测标记物来反映有无抗原抗体反应，从而测出微量的抗原或抗体。 * 酶联免疫吸附试验原理 利用标记技术将酶标记到抗体（抗原）上，使待检物中相应的抗原（抗体）与酶标记抗体（抗原）发生特异性反应。在遇到相应的酶底物时，酶分解底物，生成有颜色的产物。根据颜色的深浅,可以判断待检物中有无特异的抗原（抗体）以及量的多少。检测方法有直接法、间接法、双抗体法和抗原竞争法。 * 直接ELISA 间接ELISA 双抗体夹心法 包被(未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗原） 加入待检标本 （未知抗体） 加入酶标第二抗体 ﹙抗抗体﹚ 洗板 加底物 加终止液 包被(已知抗体） 加入待检标本 （未知抗原） 加入酶标抗体 洗板 加底物 加终止液 原理示意图 * 人血清IgG抗体的检测 ——直接ELISA法 测定原理： 将待检标本包被反应板，再加入酶标羊抗人IgG抗体。当标本中存在IgG时，该抗体与包被IgG结合，最后形成IgG-酶标羊抗人IgG抗体复合物，加入底物产生显色反应。 * 包被：用包被缓冲液将纯化抗体做10倍稀释，在每个聚苯乙烯板的反应孔中加0.1ml稀释液，4℃过夜。 加酶标抗体：每孔加入稀释至工作浓度的酶标抗体100μl，37℃孵育1h。 洗涤：用洗涤液洗涤3次，每次3min，甩净，拍干。 洗涤：手工洗板，弃液拍干，重复5次 加底物显色：每孔加底物液50μl，置37℃孵育15min。 终止反应：每孔加入50μl的2M H2SO4，混匀 【步骤】 封闭：每孔加入封闭液0.1ml， 4℃孵育1h 。 * * * *
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