选修1-专题4.3.酵母细胞固定化题材.pptVIP

* * 课题3 酵母细胞的固定化 在应用酶的过程中，人们发现了一些实际问题：酶通常对强酸、强碱、高温和有机溶剂等条件非常敏感，容易失活；溶液中的酶很难回收，提高了生产成本，也可能影响产品质量。在本课题中，我们将动手制备固定化酵母细胞，体会固定化酶的作用。 研究目的： 1．固定化酶的应用实例--生产高果糖浆 1 高果糖浆的生产原理： 葡萄糖异构酶 果糖 葡萄糖 基础知识： 2 葡萄糖异构酶固定： 将葡萄糖异构酶固定在颗粒状载体上，装入反应柱中。 3 高果糖浆的生产操作 （识图4－5反应柱）： 从反应柱上端注入葡萄糖溶液，从下端流出果糖溶液，一个反应柱可连续使用半年。 固定化酶的优点：易接触、易分离、反复接触 2．固定化技术的方法（识图4－6固定方法） 利用物理或化学方法将酶或细胞固定在一定空间内的技术，包括： 包埋法、化学结合法和物理吸附法 包埋法： 是指将酶包裹在不溶于水的多孔载体中，如将酶包裹在聚丙稀酰胺凝胶等高分子凝胶中，或包裹在醋酸纤维素等半透性高分子膜中的方法。 将酶和细胞固定化方法有： 适用范围：细胞的固定 化学结合法 将酶分子或细胞相互结合，或将其结合到纤维素、琼脂糖等载体上的固定方式。 将酶和细胞固定化方法有： 物理吸附法 指将酶吸附到固体吸附剂表面的方法，固体吸附剂多为活性炭、多孔玻璃等。 将酶和细胞固定化方法有： 【比较】酶和细胞的固定方法和特点 固定对象 酶 细胞 适宜固定法 化学结合法、 物理吸附法 包埋法 特 点 酶体积小，个体小的酶容易从包埋材料中漏出 细胞个体大，难以被化学结合和吸附 项目 固定化酶 固定化细胞 常用 方法 化学结合法 物理吸附法 包埋法 是否需要营养 不需要 需要 不足 一种酶只能催化一种或一类物质的化学反应，而生产实践中，很多产物的形成都通过一系列的酶促反应才能得到。 固定后的细胞与反应物不容易接近，可能导致反应效果下降等。 优点 既能与反应物接触，又能与产物分离，同时固定在载体上的酶可反复使用 成本低， 操作更容易 固定化酶和固定化细胞的比较 2．实验设计 1．制备固定化酵母细胞 （1）酵母细胞的活化 （2）配制CaCl2溶液 （3）配制海藻酸钠溶液 （4）海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合 （5）固定化酵母细胞 2．固定化酵母细胞的发酵 （6）冲洗；（7）发酵 1．制备固定化酵母细胞 （1）酵母细胞的活化： 〖思考3〗活化是指什么？ （2）配制CaCl2溶液： 活化是指让处于休眠状态的微生物重新恢复正常生活状态的过程。 1g干酵母＋10mL蒸馏水→50mL烧杯→搅拌均匀→放置1h，使之活化。 0.83gCaCl2＋150mL蒸馏水→200mL烧杯→溶解备用。 2．实验设计 （3）配制海藻酸钠溶液： 〖思考4〗微火加热并不断搅拌的目的是什么？ （4）海藻酸钠溶液与酵母细胞的混合： 防止海藻酸钠焦糊。 将溶化的海藻酸钠溶液冷却至室温，加入活化酵母细胞液，搅拌后吸入到注射器中。 0.7g海藻酸＋10mL水→50mL烧杯→酒精灯微火（或间断）加热，并不断搅拌，使之溶化→蒸馏水定容到10mL。 2．实验设计 〖思考5〗为什么要海藻酸钠溶液冷却后才能加入酵母细胞？ （5）固定化酵母细胞： 防止高温杀死酵母细胞。 以恒定速度缓慢地将注射器中的溶液滴加到CaCl2溶液中，形成凝胶珠状颗粒。 2．实验设计 （6）冲洗：将固定的酵母细胞凝胶珠用蒸馏水冲洗2～3次。 （7）发酵：150mL10％葡萄糖＋固定化酵母细胞→200mL锤形瓶→密封→25℃发酵24h。 2．固定化酵母细胞的发酵 2．实验设计 〖思考6〗发酵过程中锥形瓶为什么要密封？ 〖思考7〗锥形瓶中的气泡和酒精是怎样形的？ 〖思考8〗在利用固定化酶或固定化细胞进行生产的过程中，需要无菌操作吗？ 酵母菌的酒精发酵需要缺氧条件。 酵母菌进行无氧呼吸产生的。 需要。 2．实验设计 例1．下列有关固定化技术的叙述，正确的是（ ） A．固定化酶只是在细胞内才能发挥作用 B．固定化酶能提高酶的利用率 C．酶的固定是酶分离纯化的常用方法 D．固定化酶的固定化方式就是吸附在固体表面上。 B 例2．关于固定化细胞的叙述，正确的是 A．催化效率高，低耗能、低污染 B．对环境的条件非常敏感，容易失活 C．既能与反应物充分接触，又能与产物分离 D．成本低、操作简单，但反应效果可能很低 C *