桂枝桃仁及其配伍对抗凝血作用影响的研究.docVIP

桂枝桃仁及其配伍对抗凝血作用影响的研究 　　摘要：目的 桂枝、桃仁单用及配伍后对抗凝血作用的比较研究，以阐明两者配伍关系。 方法 取昆明种小鼠50 只，随机分 5组，分别为空白组、阿司匹林组、桂枝组、桃仁组、配伍组。分别灌胃给药，连续 10 d。测定出血时间、凝血时间、凝血酶时间。 结果 与空白组比较，桂枝组能明显延长凝血时间，差异有统计学意义（P0.05），桃仁组、配伍组均能明显延长出血时间和凝血酶时间，差异有统计学意义（P0.05）。与桂枝组比较，配伍组明显延长出血时间，差异有统计学意义（P0.05）。 结论 桂枝、桃仁配伍后较单药桂枝抗凝血作用更强，符合七情相使的配伍关系。 　　关键词： 桂枝；桃仁；配伍 　　中图分类号： R285.6 文献标志码 ：A 　　文章编号 ：1007-2349（2014）01-0064-02 　　临床常以桂枝、桃仁两药配伍基本构成的方剂，利用通脉行瘀的特点，用来治疗瘀血内结的各种病证。目前实验报道多集中对单味药或将桂枝-桃仁放入中药复方的药效学研究，而对两者配伍后的报道甚少。因此，本研究在中药七情配伍理论的指导下，观察桂枝-桃仁配伍后与单味药相比，对小鼠出、凝血时间和凝血酶时间的影响，探讨两者的配伍关系。 　　1 材料 　　1.1 实验动物 昆明种小鼠，体重为（20±2）g，雌雄各半，由广西中医药大学实验动物中心提供。动物合格证号：SYXK 桂2011-0001。 　　1.2 药物 桂枝为樟科乔木植物肉桂（Cinnamomum cassia Presl）的嫩枝[1]。桃仁为蔷薇科小乔木桃[Prunus persica（L.）Batsch或山桃P.davidiana（Carr.）Franch.]的成熟种子[1]。桂枝、桃仁均购置广西中医药大学附属第一医院中药房，并经广西中医药大学药学院中药鉴定教研室教授鉴定为正品。生产批号阿司匹林肠溶片，25 mg/片，南京白敬宇制药有限责任公司。无菌生理盐水，100 mL/瓶。 　　凝血酶时间测定试剂盒（液体），购自南京建成生物工程研究所。GB-204型电子秤，瑞士梅特勒-托利多仪器上海有限公司。内径1 mm，长15 cm的玻璃毛细管，华西医科大学仪器厂。移液枪，上海肯强仪器有限公司。磨砂载玻片、镊子、剪刀、离心管1.5 mL、灌胃针头、注射器、滤纸、秒表、解剖刀、小鼠固定器等均由广西中药药效研究重点实验室提供。 　　2 方法 　　2.1 分组 取昆明种小鼠50只，按小鼠体重随机分5组：空白组；阿司匹林组；桂枝组；桃仁组；配伍组。 　　2.2 药液制备 按照传统煎煮法，将药材桂枝、桃仁、桃仁-桂枝（1：1）分别煎煮。先将药材置煎煮容器内，加5～7倍量的自来水浸泡30 min，过滤。煎煮3遍，头煎40 min，药渣加3～5倍量水继续煎煮，二煎20 min，混匀，合并2次滤液，浓缩至所需浓度。冷却装入灭菌药瓶，置4℃冰箱备用。 　　2.3 处理方法 所有小鼠分笼饲养于广西中医药大学实验动物中心。自由饮水、进食，定期更换垫料，适应环境3 d后，开始灌胃，灌胃严格遵循操作规则及浓度要求，减少由操作不当引起的动物死亡。每日1次，连续10 d。灌胃均按0.2 mL/20 g。空白组给予等体积的生理盐水。 　　2.4 观察指标及检测方法 　　2.4.1 小鼠出血时间的测定 采用断尾法[2]。末次给药1 h后将小鼠固定，用毫米尺测量尾长度后，用手术剪于距尾尖1.5 mm处剪断尾，待血液自行溢出开始计时，每间隔30 s用滤纸吸去血滴1次，直至血流自然停止（用滤纸吸时无血为止），即为出血时间。 　　2.4.2 小鼠凝血时间的测定 采用毛细玻管法[2]。末次给药1 h后，将内径为1 mm，长度为15 cm的玻璃毛细管插入小鼠内眦球后静脉丛，至毛细玻管内血柱超过10 cm时取出，平放于桌面，每隔30 s折断毛细管约0.5 cm，并缓慢向左右拉开，观察折断处是否有血丝，自血液流入毛细管内开始计时，至血凝丝出现为止，即为凝血时间。 　　采用玻片法[2]。末次给药1 h后，将5号针头插入小鼠眼眶内，使血液自动流出，去掉第一滴血后，在载玻片上滴1滴血，直径大约5 mm，立即用秒表计时，每隔30 s用大头针自血滴边缘向中间轻挑一次，当有血丝挑起时停止计时，即为凝血时间。左右各测一次，取平均值。 　　2.4.3 小鼠凝血酶时间测定 小鼠来源、分组、给药同前，末次给药后1h摘眼球取全血，全血与0.109M的柠檬酸三钠按9：1混合均匀，3000 rp离心15min，收集上层血浆，转移到离心管中，预热至37℃水浴，孵育3 min，加配制好的凝血酶试剂0.l mL，秒表记录。实验操作严格按照试剂盒要求操作。 　　2.5 统计方法 采用S