农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化.docVIP

农杆菌介导phyA基因转化玉米愈伤组织培养体系的优化 　　摘要：以根癌农杆菌（Agrobacterium）EHA105介导外源基因phyA转入玉米（Zea mays L.）自交系GS01的胚性愈伤组织， 并利用除草剂（草胺磷）筛选出抗性愈伤组织，培养并获得再生植株。结果表明，菌液浓度及侵染时间显著影响愈伤组织的转化率;不同激素种类及配比对抗性愈伤组织再生植株的影响明显。当菌液浓度OD600 nm为0.6，侵染时间为20 min时，抗性愈伤组织的转化率最高，达到了68.7%，为玉米农杆菌转化并获得再生植株奠定了基础。 　　关键词：农杆菌（Agrobacterium）;玉米（Zea mays L.）自交系;遗传转化;phyA基因 　　中图分类号：S513.032 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2015）02-0465-03 　　DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.02.054 　　Optimizing Conditions of Transforming phyA Gene into Maize with Agrobacterium 　　XU Dan-dana，WANG Pi-wub，ZHAO Han-dana，LIU Shuanga，CHENG Zhao-tinga，GUAN Shu-yana 　　（a.College of Life Sciences;b. College of Agronomy，Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China） 　　Abstract： Foreign gene phyA was transfered to embryonic callus of maize inbred lines GS01 with Agrobacterium EHA105-mediated. Herbicides （alachlor P） were used to screen resistant callus and regenerate plantlets. The results showed that bacteria concentration and infection time affected callus conversion rate significantly. Types of hormone and proportion affected obviously regeneration plantlet of resistant callus. Bacteria concentration was 0.6 at OD600 nm. Infection time was 20 min. Resistant callus rate was high with 68.7%. It will provide a good reference for the regeneration and transformation of maize mediated by Agrobacterium. 　　Key words： Agrobacterium; maize inbred lines; genetic transformation; phyA gene 　　玉米（Zea mays L.）是粮食作物中重要的工业原料，在全世界粮食生产中占有举足轻重的地位[1-3]。2010年，我国玉米种植面积达到了324万hm2，成为世界第二大玉米生产国，而玉米也成为了我国的“谷物之王”[4]。玉米在我国经济生产中占有重要地位，因此大力提高玉米的产量及品质，成为了众多学者积极探寻的问题[5-7]。植酸酶能有效地水解食物以及土壤中植酸态有机磷，释放出生命体可以直接吸收利用的无机磷酸及其铁、钙、锌、镁等盐类，有效地提高了其生物利用率。因此，植酸酶基因克隆及导入受体组织并获得可再生植株对研制植酸酶食品或饲料添加剂、开发高级保健食品和优质饲料、循环利用土壤中有机磷、缓解全球性磷矿产资源危机等具有重要意义[8-13]。本研究以玉米自交系GS01的胚性愈伤组织为材料，将连有根部特异性启动子和植酸酶基因phyA的载体转入玉米自交系中，对影响农杆菌介导的玉米遗传转化的因素进行探讨，从而确定了农杆菌介导转化的最佳菌液浓度及最佳侵染时间，优化了农杆菌介导玉米遗传转化条件，并成功获得玉米抗性苗，为基因工程育种打下了基础，为获得含有phyA基因的转基因玉米植株提供了条件，同时为进一步提高玉米的产量及品质的研究奠定了基础。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 　　1.1.1 外植体 采用玉