维生素B12的定性定量检测.docVIP

维生素B12的定性定量检测 一、实验目的和要求 掌握紫外可见分光光度计的结构及基本操作； 掌握吸收曲线的绘制； 掌握利用分光光度法进行定性鉴别及定量检测的方法。 二、实验原理 维生素B12的水溶液在278土1nm、3611土1nm、550土1nm三个波长处有较强吸收峰，壁纸根据其吸收光谱的形装和吸收峰的吸光度比值，可对维生素B12进行定性鉴别；采用吸光系数法，测量其在最大吸收波长的吸光度值，可计算样品中维生素B12的含量。 三、实验步骤 1、溶液配制 用加样器移取维生素B12注射液500μl，转移至10ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。 2、吸光度、透射比及吸收曲线的绘制 用1cm比色皿，以蒸馏水作为参比溶液，测定所配置的维生素B12溶液在下列各个波长处的吸光度、透射比；在坐标纸上以测定的吸光度为纵坐标，波长为横坐标制图，绘制吸收曲线，并根据吸收曲线确定定性、定量分析。 波长 359nm 360nm 361nm 362nm 363nm 吸光度 0.461 0.467 0.466 0.457 0.447 透射比 34.5 34.0 34.2 34.8 35.7 波长 548nm 549nm 550nm 551nm 552nm 吸光度 0,134 0.135 0,136 0.134 0.133 透射比 73.3 73.3 73.2 73.4 73.6 四、实验数据处理 1、定性鉴别 根据中国药典规定，维生素B12的水溶液在3611土1nm、550土1nm波长的吸光的比值在3.15~3.45之间，表明样品为维生素B12，即为合格药品。 3.43 2、定量检测 根据浓度25μg/ml维生素B12的注射液在3611土1nm、550土1nm波长的吸光的比值，按照下列计算的维生素B12注射液含量，结果在90.0~110.0之间，表明维生素B12注射液含量合格；其中207维生素B12为在波长的吸收系数，20为稀释因子。 维生素B12含量 x100％ 90.2 五、实验体会 1. 实验得到的数据偏小，可能是实验过程中存在着误差。误差可能存在于读数、维生素B12溶液移取过程、比色皿上有污渍水迹及其润洗、分光光度计的操作中。而多次重复，在同一波长所得吸光度值也不一样，与波长的调节有关。 2.在实验中，第一次检测波长在548nm~552nm之间的吸光度值变化微小，数据不理想，当把调到380nm~1000nm后，第二次试验结果明显比第一好。在实验过程中，我们除了把实验操作规范化和熟练实验步骤外，还应细心观察，对我们所用的仪器要有相当的认知。 3.使用分光光度计之前，需要预热30分钟左右，而未放入比色皿时，必须将样品室仓盖打开，以免影响分光光度计的使用期限和灵敏度。