《分子生物学教学课件》第十章 复制.pptVIP

第三篇 基因信息的传递 DNA的生物合成(复制) RNA的生物合成(转录) 蛋白质的生物合成(翻译) 基因表达的调控 基因重组与基因工程 概 述 基因(gene) 基因是为生物活性物质编码的DNA功能片段，这些产物是蛋白质或是各种RNA。 掌握的内容第一节 DNA复制的基本规律:半保留复制的概念；复制的半不连续性; 领头链；随从链；冈崎片段第二节 DNA复制的酶学和拓扑学变化 1. 复制的反应体系 2. DNA聚合酶：真核生物和原核生物的DNA聚合酶 3. 复制保真性的酶学依据：核酸外切酶活性、校读、碱基选择 4. 复制的解链和DNA分子的拓扑学变化：解螺旋酶、引物酶、单链 DNA结合蛋白；拓扑异构酶；DNA连接酶第三节 DNA生物合成的过程 1. 原核生物的DNA合成：复制的起始：解链，引物和引发体，复制的延长，复制的终止。 2. 端粒和端粒酶的结构和作用机制第四节 逆转录的概念、逆转录酶 * 复制的基本规律 半保留复制(semi-conservative replication) 双向复制(bidirectional replication) 半不连续复制(semi-discontinuous replication) 复制具有高保真性 (high fidelity) 一、半保留复制 DNA生物合成时，母链DNA解开为两股单链，各自作为模板(template)，按碱基互补配对规律合成子链。子代细胞的DNA，一条链从亲代完整地接受过来，另一条链则完全从新合成。两个子细胞的DNA都和亲代DNA碱基序列一致。这种复制方式称为半保留复制。 二、双向复制 生物复制时，DNA从起始点(origin)向两个方向解链，形成两个延伸方向相反的复制叉，称为双向复制。 真核生物每个染色体有多个起始点，把一个DNA复制起始点起始的区域称为复制子 (replicon) 。 复制子是独立完成复制的功能单位。 真核生物是多复制子的复制。 聚合反应的特点 ﹡DNA新链生成需引物和模板； ﹡新链的延长沿5?→3?方向进行； ﹡底物是脱氧三磷酸核苷，结合上的是脱氧一磷酸核苷； ﹡DNA聚合酶根据模板选择碱基; ﹡碱基配对形成氢键;A＝T C ≡G ﹡核苷酸之间生成3′-5′磷酸二酯键. 二、DNA聚合酶 全称：依赖DNA的DNA聚合酶 (DNA-dependent DNA polymerase) 简称：DNA-pol 复制起始的步骤 DnaA 辨认并结合到起始点 真核生物每个染色体有多个起始点，是多复制子复制。复制有时序性，即复制子以分组方式激活而不是同步起动。 复制的起始需要DNA-polα（引物酶活性）和polδ（解螺旋酶活性）参与。还需拓扑酶和复制因子(replication factor, RF)。 增殖细胞核抗原（proliferation cell nuclear antigen，PCNA）在复制起始和延长中起关键作用。PCNA为同源三聚体，具有与E.coli DNA 聚合酶Ⅲ的β亚基相同的功能和相似的构象，即形成闭合环形的可滑动DNA夹子，在RFC的作用下PCNA结合于引物－模板链；并且PCNA使polδ获得持续合成能力。PCNA水平也是检验细胞增殖的重要指标。 （二）真核生物复制的延长发生DNA聚合酶α/δ转换 DNA-polδ和polα分别有解螺旋酶和引物酶活性。在复制叉及引物生成后，DNA-polδ通过PCNA的协同作用，逐步取代polα，在RNA引物的3?-OH基础上连续合成领头链。随从链引物也由polα催化合成。然后由PCNA协同，polδ置换polα，继续合成DNA子链。 RNA病毒分类 1.正链RNA病毒: 如脊髓灰质炎病毒和Qβ噬菌体 它们先合成(-)RNA，再以之作为合成子代(+)RNA的模板。 2.负链RNA病毒: 如狂犬病病毒和疱疹性口炎病毒； 其病毒(一)RNA是(+)mRNA合成的模板。 3.双连RNA病毒:如呼肠孤病毒 其病毒(±)RNA指导(+)mRNA的不对称合成。 4.逆转录病毒: 如Rous肉瘤病毒和艾滋病毒 通过DNA表达病毒(+)RNA的遗传信息。 这个DNA中间物是(+)RNA合成的模板。 逆转录病毒的信息流是从RNA到DNA，再返回RNA。 端粒酶的催化延长作用 爬行模型 目 录 DNA聚合酶复制子链 进一步加工 目 录 逆转录和其他复制方式 Reverse Transcription and Other DNA Replication Ways 第四节 逆转录酶(reverse transcri