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RNA相关技术在生命科学研究中的应用 摘要 自DNA双螺旋模型发现以来，生命科学的研究的重点就集中在了DNA，我们从基本的组成、结构知道所包含的遗传信息和功能方面进行了详细的研究。而RNA作为一个新兴的研究热点，展现了其在生命中发挥着重要的作用，并且有很多新的机制是不为我们所知的。其中，RNA干扰的发现，更是为使理论生物学的研究插上了一双“翅膀”，我们可以站在更高的层次去了解生命。RNA 干扰是由双链RNA 引起的序列特异的基因沉默现象。由于RNA 干扰能在细胞组织及动物模型中沉默疾病相关基因，因此，RNA 干扰也是各种疾病治疗的有效手段。在哺乳动物细胞内诱导RNA 干扰可以通过导入小干扰RNA(siRNA)，或是以质粒、病毒为载体表达短的发夹RNA(shRNA)而实现。 Progress in RNA interference therapeutics Abstract RNA interference (RNAi) is a conserved biologic response to double-stranded RNA that resulted in the sequence-specific silencing of target gene expression. RNAi is a valuable tool in the treatment of diseases for its potency to silence disease-associated genes in tissue culture and animal models. RNAi can be induced in mammalian cells by the introduction of chemically synthesized small interfering RNAs (siRNAs) or by plasmid and viral vectors that express short-hairpin RNAs (shRNAs) that can be processed to siRNAs by the cellular machinery. In this review, we focus on the potential therapeutic use of RNAi. Also reviewed, are the challenges involved in developing RNAi for clinical use. 1995年，康乃尔大学的Su Guo博士在试图阻断秀丽新小杆线虫(C.elegans)的par-1基因时，发现了一个意想不到的现象。她们本想利用反义RNA技术特异性地阻断上述基因的表达，而同时在对照实验中给线虫注射正义RNA以期观察到基因表达的增强，但得到的结果是二者都同样地切断了par-1基因的表达途径。这是与传统上对反义RNA技术的解释正好相反。该研究小组一直未能给这个意外以合理解释。 　1998年，华盛顿卡耐基研究院的Fire和麻省大学医学院的Mello首次在秀丽新小杆线虫中证明上述现象属于转录后水平的基因沉默。他们发现Su Guo博士遇到的正义RNA抑制基因表达的现象，以及过去的反义RNA技术对基因表达的阻断，都是由于体外转录所得RNA中污染了微量双链RNA而引起。当他们将体外转录得到的单链RNA纯化后注射线虫时发现，基因抑制效应变得十分微弱，而经过纯化的双链RNA却正好相反，能够高效特异性阻断相应基因的表达，其抑制基因表达的效率比纯化后的反义RNA至少高2个数量级。该小组将这一现象称为RNA干扰。 　在1999年短短的一年间,发现RNA干扰现象广泛存在于从植物、真菌、线虫、昆虫、蛙类、鸟类、大鼠、小鼠、猴一直到人类的几乎所有的真核生物中细胞。2000年，又先后发现小鼠早期胚胎中和大肠杆菌中也存在ＲＮＡ干扰现象。RNA 干扰(RNA interference, RNAi) 是由双链RNA引起的序列特异的基因沉默现象。人们通常采用两种方式实现RNA干扰：一种是向细胞直接转染人工合成的小干扰RNA(small interfering RNA, siRNA);另一种则是以质粒或病毒为载体表达短的发夹RNA(short-hairpin RNA, shRNA)。由于RNA干扰具有特异性、高效性及多能性的优点，近年来已被广泛用于各种疾病的治疗。 第一章 RNA干扰的机制 1.1 siRNA参与的RNA干扰 　　RNA干扰作用是通过一类较稳定的中间介质实现的。对植物的研究证明，双链RNA复合体先降解成为35nt左右的小RNA分子，然后他们通过序列互补与mRNA结合，从而导致mRN