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利用玉米萌动胚获得抗除草剂转基因新材料 　　摘要：从甲磺隆抗性结缕草植株中克隆得到乙酰乳酸合成酶基因（ALS），构建35S启动子驱动的该基因的植物表达载体p33-ALS。用农杆菌介导的玉米萌动胚转化方法转化玉米种子，获得抗除草剂的转ALS基因玉米材料。结果表明，经除草剂筛选共获得抗性植株7株，阳性率为1.4%，T1代植株除草剂抗性试验表明，转基因植株能够耐受住5%的甲磺隆溶液喷洒。分离得到的ALS基因导入玉米基因组后能够极大地提高对甲磺隆的耐受能力。 　　关键词：玉米；萌动胚；农杆菌；遗传转化 　　中图分类号：S513；Q785 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2014）17-4001-04 　　Generating Herbicide Resistant Transgenic Plants in Maize with 　　Germinating Embryo as Explants 　　ZHONG Yi1， WANG Yun-peng2， DAI Xiu-yun1， LIU Wen-guo2 　　（1. Maize Research Institute， Jilin Academy of Agricultural Sciences， Gongzhuling 136100， Jilin， China； 2. College of Agriculture， Jilin Agricultural University， Changchun 130118， China） 　　Abstract： The plant expression vector p33-ALS driven by 35S promoter was constructed from the resistance of a short cycling zoysia plants originated from cloning ALS gene. The genetically modified maize with herbicide resistance ALS gene was obtained with agrobacterium mediated transformation of stirring of maize embryo into maize seeds. The results showed that the positive rate of the resistant 7 plants filtrated by way of herbicide was 1.4%. Herbicide resistance of the T1 generation plant showed that the transgenic plants tolerated a solution spray with 5% metsulfuron-methyl. The ALS gene isolated from this study after transferred into maize genome can greatly improve maize tolerance of metsulfuron-methyl. 　　Key words： maize； germinating embryo； agrobacterium tumefaciens； genetic transformation 　　杂草是危害农作物的主要生物胁迫之一，尽管其对玉米生长中后期不再产生影响，但早期仍需要进行除草。除草剂是玉米除草十分理想的选择，尽管已有玉米专用性除草剂出现，但是对于多数单子叶杂草，其效果仍不理想，并且与草丁膦抗性相关的bar基因、与草甘膦抗性的EPSPS基因等许多除草剂基因均已被国外育种公司注册并取得了专利保护，成为我国育种过程中进一步应用的障碍。乙酰乳酸合成酶（ALS）是植物和微生物中亮氨酸、异亮氨酸和缬氨酸合成途径的第一种酶，不同的ALS的氨基酸序列的差异与磺酰脲类除草剂抗性具有很大的关系，多数植物的ALS对磺酰脲类除草剂较为敏感，目前已在拟南芥、细菌等中对此基因进行了克隆并对氨基酸序列和除草剂抗性的关系进行了研究[1，2]，但相关的专利保护不像bar基因、EPSPS基因那样苛刻。 　　利用农杆菌侵染及基因枪轰击等方法对玉米不同来源的外植体，诸如悬浮细胞[3]、幼胚[4]、幼穗[5，6]、茎尖[7-9]、成熟胚[10，11]等进行遗传转化。这些转化方法往往需要消耗大量人力物力并有一定的基因型依赖性。由于适合进行组织培养的基因型不具备较好的农业性状，因此给进一步的转基因玉米新品种选育工作带来较多阻碍。利用农杆菌介导玉米萌动胚[1