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细胞工程第十一、十二章知识重点 2012级生物技术23班陈思宇 座机电话号码2 11植物组织培养 11.1植物组织培养的理论基础 11.1.1植物的无性繁殖：不经过卵、精细胞的结合，而是通过母体的部分组织或器官来进行繁殖的方式。 11.1.2植物细胞全能性理论：植物细胞具有全能性，即一个完整的植物细胞拥有形成一个完整植株所必需的全部遗传信息，具有发育成完整植株的潜能，在十一点条件下能够发育成一个完整植株。 11.1.3植物细胞的脱分化和再分化 脱分化：细胞分化是可逆的，分化的细胞在一定条件下可以转变为胚性状态，重新获得分裂能力。 再分化：脱分化后的分生细胞（愈伤组织）在一定的条件下重新分化为各种类型的细胞，并进一步发育成完整植株。 植物生长素和分裂素食植物细胞再分化中不可缺少的激素，两者的浓度配比在脱分化中起着关键作用。 11.2植物组织培养 11.2.1实验材料的清洗和消毒 1、自来水冲洗5min，然后用中性洗衣粉液清洗，最后再用自来水流冲洗30min，一杯药剂灭菌。 2、清洗药剂灭菌法适用于培养材料的表面消毒。药剂灭菌必须根据培养材料的特点，选择适合的药剂种类、浓度和消毒时间，原则上要求既达到灭菌的目的，又不能损伤植物组织和细胞。 11.2.2培养基 1、培养基的组成：无机营养成分（无机元素：氮、磷、硫、钙、钾、镁、铁、锰、铜、锌、硼和钼）；有机营养成分（碳源、含氮物质、植物激素类（生长素类、细胞分裂素类、赤霉素类）、琼脂、pH值。 2、培养基的选择 3、培养基的制备：用市售培养基干粉，其中含有无机盐、维生素和氨基酸。把这种干法溶解在蒸馏水里（要比培养基的最终容积少10%），加上琼脂和其他必要的补加物，再加入蒸馏水使之达到最终的容积，调节pH，高压灭菌，于是制成所需培养基。 4、培养基的灭菌 11.2.3接种：经过表面灭菌的实验材料，按照不同的要求，移至培养基上培养的过程称为接种。培养基含有植物细胞生长发育所必需的各类营养物质，也是各种细菌、真菌孳生繁殖的极好场所。因此，接种过程必须严格进行无菌操作以防止杂菌污染。 1、接种的操作步骤 2、污染的预防 11.2.4种质保存 1、超低温保存方法： 材料的选择→预处理→降温冰冻→解冻→活力测定→再培养 2、超低温保存的意义： （1）能保持细胞培养物的稳定性； （2）长期保存植物的种质资源； 3 长期保存农作物的优良品种及其育种亲本材料的种质 11.2.5植物细胞的大规模培养技术 1、植物细胞大规模培养的产业化前景 2、植物细胞的大规模培养系统 1 悬浮细胞培养系统：搅拌式生物反应器、气升式生物反应器、旋转式生物反应器； 2 固定化培养系统：包埋式、吸附式 3 植物器官培养系统 3、植物细胞大规模培养的影响因素 1 外植体的选择 2 环境因子的影响：光的影响、温度、振荡频率 3 培养基选择 12植物的快速繁殖 12.1植物快速无性繁殖：利用离体培养技术，将来自优良植株的茎尖、腋芽、叶片、鳞片等器官、组织和细胞进行离体培养，在短期内获得大量遗传性一致的植株。 1、无菌母株制备：在无菌条件下，用试管内继代增殖的植物材料，或者从植物体上分离的植物材料首先进行表面灭菌，然后在无菌条件下切割成带一两个芽的茎段，接种在特点的培养基上，诱导不定芽的形成。 2、不定芽的增殖 1 侧芽（腋芽）途径 2 器官发生途径 3 胚状体途径 3完整植株的形成：