纳米TiN修饰平面微电极阵列在神经信息双模检测中的应用.docVIP

纳米TiN修饰平面微电极阵列在神经信息双模检测中的应用 　　摘要采用氮化钛（TiN）修饰平面微电极阵列（pMEA），对其性能进行改进，开展了离体神经电生理和神经递质电化学的检测研究。采用磁控溅射法在实验室自制微电极阵列上修饰具有纳米结构的TiN材料，修饰后的微电极阻抗降低近一个数量级，背景噪声基线降至±6 μV，信噪比是修饰前的17倍。在SD大鼠离体脑片神经电生理信号检测中，信噪比可达10∶1，能分离提取±12 μV的微弱信号。神经递质多巴胺电化学信号检测下限达50 nmol/L（信噪比2∶1），浓度在005～100 μmol/L内与电流响应的线性相关系数为0998。实验结果表明，在微电极表面修饰纳米TiN，降低了微电极阻抗，提高了信噪比，实现了对神经信息微弱信号的检测。 　　关键词[HTSS]微电极阵列； 氮化钛修饰； 神经电生理； 神经电化学； 多巴胺 　　1引言 　　神经疾病已成为现代社会的一大隐患，其致病机理与脑部神经网络中神经信息的异常发放和传递有关。神经网络起沟通外部世界及协调机体内部活动的作用，是由大量神经元个体连接组成的复杂系统。神经元之间通过电学和化学两种模式的信号实现信息传递，通过对神经元胞外电生理检测可获取其电学信号； 对神经递质的释放进行电化学检测可获取其化学信号。因此，采用两种检测模式对神经电生理信号和递质化学信号的实时、准确和同步的探测，已成为研究和治疗神经疾病的基础＼[1～4＼]。 　　微电极阵列（MEA）为神经信息检测和记录的研究提供了一种高通量、高时空、分辨率和高灵敏度的检测器件。目前，微电极阵列主要分为平面MEA＼[5，6＼]（Planar MEA， pMEA）、CMOS （Complementary metal oxide semiconductor）集成MEA＼[7＼]和3D立体MEA＼[8，9＼]，研究的重点多为神经电生理信息的检测。pMEA制作工艺相对简单，批量制作成品率高，对其表面处理也更多样化和易于实现，可直接将细胞培养在其上，具有对神经细胞无损检测的优势，广泛应用于神经信息离体检测。对于神经细胞的胞外电生理检测，信号的幅度非常微弱（微伏量级），神经递质的释放也很微量（纳摩尔到微摩尔级），pMEA需克服因电极尺寸小造成的阻抗和热噪声增大等问题，而这些问题可通过对其表面进行纳米修饰得到改善＼[10～13＼]。相对于纳米铂黑、纳米铂铱和石墨烯等通过电化学沉积的电极修饰方法，用磁控溅射法修饰在电极表面的氮化钛（TiN）既能呈现出纳米结构， 又能与微电极结合牢固，可多次重复使用，且批量化成本较低。 　　本研究组自制的pMEA＼[14＼]集合了神经电生理和神经递质电化学检测的功能，为神经信息双模检测提供了一种有效工具，通过磁控溅射法修饰的纳米TiN材料与微电极结合牢固，重复使用率高，可批量制作。通过交流阻抗谱及背景噪声测试实验，考察TiN修饰pMEA的性能。采用修饰TiN的pMEA进行神经电生理检测和神经递质电化学检测实验，进一步考察其双模检测性能。 　　2实验部分 　　21仪器与材料 　　USBME16FAISystem型16通道滤波放大器（Multi Channel Systems公司），Autolab AUT85039型电化学工作站（Metrohm公司），M205C型体式显微镜（LEICA公司），S3500型扫描电子显微镜（Hitachi公司），LEAD1548型蠕动泵（兰格公司），实验室自制刺激器，MWD20型实验室超纯水器（美诚公司），BSA124S型电子天平（赛多利斯公司）。 　　多巴胺（Sigma公司），09%生理盐水（石家庄四药公司），Ag|AgCl浆（Dupont公司），人工脑脊液（ACSF）：1250 mmol/L NaCl，25 mmol/L KCl，20 mmol/L CaCl2，13 mmol/L MgCl2，13 mmol/L NaH2PO4，250 mmol/L NaHCO3，250 mmol/L Glucose，13 mmol/L LSodium Ascorbate，06 mmol/L Sodium pyruvate，pH 74，持续充入含95% O2和5% CO2的混合气体。实验所用SD大鼠海马区脑片由北京大学神经科学研究所邢国刚课题组提供，所用药品试剂均为分析纯（国产），实验用水为高纯水。 　　22平面微电极阵列芯片制备、修饰及表征 　　实验使用玻璃基底，铂作为导电材料，氮化硅作为绝缘层的自制60通道分区型平面微电极阵列芯片。芯片包含微电极阵列、电极导线、外接电路触点、神经电生理检测参比电极、神经递质电化学检测参考电极和对电极，使用MEMS（Microelectromechanical Systems）技术的薄膜工艺和光刻