食品分析技术模块二项目7、项目8详解.ppt

模块二 营养成分分析 项目7 维生素的测定 任务1 维生素C的测定(荧光法) 维生素C属于水溶性维生素，是一种已糖醛基酸，有抗坏血病的作用，所以被人们称做抗坏血酸，主要为还原型及脱氢型两种，广泛存在于植物组织中。 维生素C（还原型）纯品为白色无臭结晶，熔点190～192℃，溶于水或乙醇中，不溶于油剂。在水溶液中易被氧化，在碱性条件下易分解，在弱酸条件中较稳定。 维生素C具有较强的还原性，氧化后的产物称为脱氢抗坏血酸，进一步水解则生成2，3－二酮古乐糖酸，失去生理作用。食品分析中的所谓总抗坏血酸是指抗坏血酸和脱氢抗坏血酸二者的总量，不包括二酮古乐糖酸和进一步的氧化产物。 维生素C测定(荧光法)原理 样品中还原型抗坏血酸经活性炭氧化成脱氢型抗坏血酸后，与邻苯二胺（OPDA）反应生成具有荧光的喹恶啉(quinoxaline）,其荧光强度与脱氢抗坏血酸的浓度在一定条件下成正比，以此测定食物中抗坏血酸和脱氢抗坏血酸的总量。 分析步骤 氧化处理： 各取5ml标准氧化液于2个50ml容量瓶中，分别标明“标准”及“标准空白”。 各取5ml样品氧化液于2个50ml容量瓶中，分别标明“样品”及“样品空白”。 于“标准空白”及“样品空白”溶液中各加5ml硼酸-乙酸钠溶液，混合摇动15min，用水稀释至50ml，在4℃冰箱中放置2h，取出备用。 于“样品”及“标准”溶液中各加入5ml 50%乙酸钠溶液，用水稀释至50ml，备用。 标准曲线的制备： 荧光反应 结果计算 式中： X——样品中抗坏血酸及脱氢抗坏血酸总含量，mg/100g； C——由标准曲线查得或由回归方程算得样液中维生素C浓度，； m——样品质量，g； F——样液的稀释倍数； V——荧光反应所用样液体积，mL。 技术提示 脱氢抗坏血酸与硼酸可形成复合物而不与OPDA反应，以此排除样品中荧光杂质所产生的干扰。本方法的最小检出限为0.022g/ml。 全部实验过程应避光。 大多数植物组织内含有一种能破坏抗坏血酸的氧化酶，因此，抗坏血酸的测定应采用新鲜样品并尽快用偏磷酸-醋酸提取液将样品制成匀浆以保存维生素C。 某些果胶含量高的样品不易过滤，可采用抽滤的方法，也可先离心，再取上清液过滤。 任务2 维生素A的测定(三氯化锑比色法) 原理: 在三氯甲烷溶液中，维生素A与三氯化锑作用可生成蓝色可溶性络合物，在620nm波长处有最大吸收峰，其蓝色的深浅与维生素A的含量在一定范围内成正比，故可通过吸光度测定维生素A的含量。 分析步骤 （1）样品处理 皂化法（适用于维生素A含量不高的样品，可减少脂溶性物质的干扰，但全部试验过程费时，而且易导致维生素A的损失。）： ①皂化 ②提取 ③洗涤 ④浓缩 研磨法（适用于每克样品维生素A的含量大于5～10 样品的测定，如肝的分析。步骤简单、省时，结果准确。）： ①研磨 ②提取 ③浓缩 （2）标准曲线的绘制 准确吸取维生素A标准溶液0，0.l，0.2，0.3，0.4，0.5mL于6个10mL容量瓶中，用三氯甲烷定容，得标准系列使用液。再取6个3cm比色皿顺次加入标准系列使用液各1mL，每个比色皿中加乙酸酐1滴，制成标准比色列。于620nm波长处，以10mL三氯甲烷加1滴乙酸酐调节吸光度至0点；然后将标准比色系列按顺序移入光路前，迅速加入9mL三氯化锑-三氯甲烷溶液，于6s内测定吸光度（每个比色皿都在临测前加入显色剂）。以维生素A含量为横坐标，以吸光度为纵坐标绘制曲线。 （3）样品测定 于1比色皿中加入10mL三氯甲烷及1滴乙酸酐为空白液。另1比色皿中加入1mL三氯甲烷，其余比色皿中分别加入1mL样品溶液及1滴乙酸酐。其余步骤同标准曲线的绘制。 结果计算 式中： X——维生素A含量，mg/100g； c——由标准曲线上查得样品溶液中维生素A的含量，； c0——由标准曲线上查得样品空白液中维生素A的含量，； m——样品质量，g； V——样品提取后加入三氯甲烷定容之体积，mL； 技术提示 三氯化锑与维生素A所产生的蓝色物质很不稳定，因此要求反应在比色管中进行，产生蓝色后立即读取吸光度。 三氯化锑腐蚀性较强，不能沾在皮肤上，用过的仪器应用盐酸浸泡而后清洗。 维生素A极易被光破坏，实验操作应在微弱光线下进行，或使用棕色玻璃仪器。 乙醚为溶剂的萃取体系，易发生乳化现象。 所用氯仿中不应含有水分，因三氯化锑遇水会出现沉淀，干扰比色测定。 如果样品中含β-胡萝卜素（如奶粉、禽蛋等食品）干扰测定，可将浓缩蒸干的样品用正己烷溶解，以氧化铝为吸附剂，丙酮、乙烷混合液为洗脱剂进行柱层析。 比色法除用三氯化锑做显色剂外，还可用三氟乙酸、三氯乙酸做显色剂。其中三氟乙酸没有遇水发生