1蛋白质的沉淀反应.pptVIP

动物生物化学实验教学 实验基本教育和基本操作训练 蛋白质的沉淀反应和两性反应蛋白质透析脱盐 动物医学院 动物生物化学教研室 实验基本教育和基本操作训练 动物生化实验的重要性 生化分析技术与本专业之间的关系 本学期实验安排与要求 考核 总分100 ：40%为实验理论（闭卷） 30%为实验技能操作 40%平时（包括实验报告和平时） 实验安排 共有9个实验：动医、动药专业27学时（包括1-8个实验） 动科、水产专业18学时（包括1-6个实验） 实验一 实验基本教育和基本操作训练 蛋白质的沉淀反应和两性反应， 蛋白质透析脱盐（3学时） 实验二 蛋白质的定量测定----双缩脲法测定蛋白质浓度（3学时）* 实验三 唾液淀粉酶的活性观察（3学时） 实验四 电泳技术概论 血清蛋白质醋酸纤维薄膜电泳（3学时） 实验五 聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白（3学时）* 实验六 层析技术概论 分子筛凝胶过滤分离血红蛋白和核黄素（3学时）# 实验七 无蛋白血滤液的制备 血糖的测定（3学时）* 实验八 动物肝脏中DNA的提取和鉴定（3学时）* 实验九 脂质的提取与薄层层析（3学时）# 注：* 为综合性实验 # 为设计性实验 实验报告 实验目的 实验原理（简明，扼要） 试剂与器材（简单，主要试剂与器材） 实验步骤（详细） 结果讨论（实事求是，准确） 实验1 蛋白质的沉淀反应 蛋白质的水溶液是稳定性的胶体溶液 稳定的原因有两个 1 水膜 2 电荷 蛋白质沉淀 物理化学因素影响下，蛋白质稳定性遭到破坏，以固体的形式从溶液中析出的作用。包括可逆沉淀和不可逆沉淀 可逆沉淀（盐析和盐溶） 盐溶（salting in） 纯水或低盐溶液中溶解度较低的蛋白质，通过增加无机盐使溶解度增加 盐析（salting out） 高浓度的中性盐类可以脱去蛋白质分子表面的水膜，并中和蛋白质分子的电荷，从而使蛋白质从溶液中沉淀下来的过程 常用的中性盐：硫酸铵，氯化钠，硫酸钠等 不可逆沉淀 有机溶剂沉淀：如乙醇、丙酮、 生物碱试剂沉淀 :如苦味酸、三氯醋酸（TCA 、钨酸等.在pH值小于蛋白质pI时，其酸根负离子能与蛋白质分子上的正离子相结合 重金属盐沉淀：金属正离子与蛋白质分子中负电荷结合 加热或改变pH等  本实验选用卵蛋白（结合蛋白） 卵清蛋白 球蛋白 角蛋白 粘蛋白等 从卵蛋白中分离出清蛋白和球蛋白？ 实验2 蛋白质的透析脱盐 透析法（dialysis） 蛋白质是生物大分子，分子的直径在1-100nm之间，不能通过半透膜（有微孔的膜）；而无机盐等小分子化合物能自由通过半透膜。利用这一特性，将蛋白质与小分子化合物分离开来。这就是透析 本实验利用透析的方法把实验一盐析中所用硫酸铵去掉，达到分离纯化的目的 实验3 蛋白质的两性实验 ---酪蛋白pI的测定 蛋白质与氨基酸类似，是两性电解质 蛋白质分子在等电点时不带电荷，溶解度最低，容易聚集沉淀 本实验利用溴甲酚绿做指示剂，根据颜色的变化和等电沉淀的原理，确定待测蛋白酪蛋白的pI 实验步骤 见讲义 实验结果 从卵蛋白中分离并纯化出清蛋白和球蛋白，确定可逆和不可逆沉淀剂? 纯化所分离出的清蛋白和球蛋白 确定酪蛋白的pI? 注意事项 用干滤纸 硫酸铵缓慢加入 玻璃纸用橡皮筋扎紧 思考题 等点沉淀的原理？ 盐析、透析及其原理？ * * 地点：逸夫楼2003 实验一 了解生化实验的基本目的和要求 熟悉生化实验的常用仪器 了解蛋白质的沉淀、盐析、两性反应及透 析脱盐的原理 掌握蛋白质盐析和透析等操作技术 目的 实验所用半透膜：玻璃纸 *