实验课教学(革兰氏染色)讲解.pptVIP

细菌的革兰氏染色Gram stain 时间：10分钟 岗位代码：1217 考生：曾颖 * 一、背景知识 丹麦病理学家Christain Gram，1884年 德国病理学家Carl Weigert,番红染色 鉴别染色为 革兰氏阳性菌（G+） 革兰氏阴性菌（G-） * 学习并掌握革兰氏染色法 了解革兰氏染色原理 巩固显微镜操作技术（油镜） * 二、目的要求 细菌细胞壁结构和组成差异所决定： 革兰氏阳性菌细胞壁:肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，呈蓝紫色。 革兰氏阴性菌细胞壁:较薄，肽聚糖含量低，交联度低，脂质含量高。 * 三、实验原理 1.菌种 大肠杆菌、金黄色葡萄球菌（18h牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物） 2.溶液和试剂 草酸铵结晶紫染液，卢戈氏碘液，95%乙醇，番红复染液等。 3.仪器和其他用品 酒精灯，载玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，试管架，镊子，载玻片支架，滤纸，滴管等 * 四、实验器材 * 五、实验步骤 初染 （1-2min） 媒染 （1min） 脱色 （20-30s） 复染 （2min） 吸去残水晾干 水洗 水洗 水洗 水洗 * 六、实验预期结果 混合涂片染色 大肠杆菌（G-） 金黄色葡萄球菌（G+） 细菌因素：选择活跃生长期菌种（18-24h），老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。 操作因素：涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。 染色因素：脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色过度造成假阴性，脱色不够造成假阳性。 显微镜保养：正确使用，用毕，擦拭油镜，登记。 * 七、注意事项 实验报告 1.油镜下菌体图像（拍照或绘制） 2.结果记录表： 思考题 1.革兰氏是否成功，有哪些问题需要注意，为什么？ 2.你认为革兰氏染色法中哪个步骤可以省略？在何种情况下可以省略？ 3.为什么用老龄菌进行革兰氏染色会造成假阴性？ * 八、总结与思考 菌名 菌体颜色 细菌形态 结果（G+,G-） 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 Thank You! *