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一、动物细胞培养 从动物机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖。 1、动物细胞的培养过程 原代培养:从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。培养的第1代细胞与传10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养:将原代细胞从培养瓶中取出,配制成细胞悬浮液,分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养,称为传代培养。 培养器皿 2、动物细胞培养的条件 1)、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液) 2)、营养 (葡萄糖、氨基酸、无机盐、微量元素、动物血清、血浆等。) 3)、温度和PH 36.5 +0.5度 ;PH为7.2-7.4。 4)、气体环境: O2和CO2(95%空气和5% CO2 ) 动物细胞特点? 分化潜能变窄:随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄,这是指整体细胞而言。 细胞核仍具有全能性:细胞核,它含有保持物种遗传性所需的全套基因,而且并没有因细胞分化而丢失基因,因此高度分化细胞的细胞核仍具有全能性 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 动物核移植: 将动物的一个细胞的细胞核,移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中,使其重组并发育成一个新的胚胎,这个新的胚胎最终发育为动物个体。 二、、动物体细胞核移植技术和克隆动物 1、体细胞核移植的过程 * 如何获取大量的皮肤细胞? 皮肤移植 第44页概念 原理:细胞增殖 幼龄动物 取动物器官 和组织 剪碎组织 胰蛋白酶处理 细胞培养 单个细胞 用胰蛋白酶分散成单个细胞,说明细胞间的物质是什么?用胃蛋白酶行吗? 为何选幼龄动物组织或器官进行细胞培养? 动物细胞培养过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 (分解纤维蛋白) 动物细胞培养过程: 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 单个细胞 加培养液 遗传物质未改变 遗传物质已改变 动物组织细胞间隙中含有一定量的弹性纤维等蛋白质,将细胞网络起来形成具有一定弹性和韧性的组织和器官。 (分解纤维蛋白) 细胞株:原代细胞一般传至10代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到40~50代,这种传代细胞为细胞株。 细胞系:细胞株传代至50代后又出现细胞生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。 细胞株和细胞系的区别: 细胞系的遗传物质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。 动物细胞培养瓶内表面为什么 要光滑、无毒? 补充合成培养基中缺乏的物质 (1)生产蛋白质生物制品:病毒疫苗、干扰素、单克隆抗体等。 (2)获得大量自身的皮肤细胞,用于植皮。 (3)用于检测有毒物质 (4)用于生理、病理、药理等方面的研究,为治疗和预防疾病提供理论依据 3、动物细胞培养的应用 细胞的全能性 细胞株、细胞系 植物体或组织 培养结果 获得细胞 或细胞分泌蛋白 快速繁殖、培育无病毒植株等 培养目的 葡萄糖、动物血清 蔗糖、植物激素 培养基特有成分 液体培养基 固体培养基 培养基性质 细胞增殖 原理 动物细胞培养 植物组织培养 比较项目 利用动物体细胞核移植技术 用核移植的方法得到的动物。 克隆动物: 多莉——细胞工程的一个里程碑! 卵细胞 母羊B 母羊A 乳腺细胞 胚胎移植 细胞核移植 细胞质 融合后的卵细胞 细胞核 母羊C子宫 早期胚胎 多莉羊 分娩 卵裂 妊娠 多莉羊的培育过程 问题 1、多莉羊是雄还是雌? 2、为什么要使用卵细胞? 3、克隆羊多莉的成功证明了什么? 卵细胞 A母绵羊 B母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的卵细胞 供体细胞(供核) 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞(MⅡ中期:供质) 去核 无核卵母细胞 注入 细胞融合 重组细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段:核移植和胚胎移植 2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状
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