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实验八 血糖的定量测定—葡萄糖氧化酶-氨基安
替比林 GOD-PAP 法
一、目的要求
学习和掌握用葡萄糖氧化酶-氨基安替比林 GOD-PAP 法测定血糖含量的原理和方法。
二、实验原理
动物血液中的糖主要是葡萄糖。正常情况下，其含量处于动力学稳态。健康家兔的血糖水平为80~120mg/dL dL代表100ml 。GOD-PAP法是以葡萄糖氧化酶和过氧化物酶相连接的测定方法，可用于测定血糖样品中的葡萄糖含量。在生物体系中，许多酶促反应的底物和产物都不能吸收光。因此，在测定催化该反应的酶时，常常将其与另一个涉及底物或产物有特征性光吸收变化的酶反应相偶联。例如，在葡萄糖氧化酶作用下，底物葡萄糖特异转化为产物葡萄糖酸和过氧化氢，底物和产物都并无可见光吸收。但是，在有过氧化物酶的存在下，过氧化氢能与4-氨基安替比林 色素原 反应产生红色化合物，其最大光吸收在480~550nm，能很容易地进行测定。
GOD-PAP法测定血糖的酶反应为：
葡萄糖+O2+H2O 葡萄糖氧化酶 GOD →葡萄糖酸+H2O2
2H2O2+4-氨基安替比林+酚 过氧化物酶 POD →醌亚胺+4H2O
醌亚胺在480~550nm波长有最大吸收，所产生颜色的深浅与血清中葡萄糖的量成正比。通过比色测定和计算即可求出样品中葡萄糖的含量。
三、材料、器材与试剂
1〉材料
兔血清。
2〉器材
试管、试管架、吸管、洗耳球、微量移液管、恒温水浴、分光光度计。
3〉试剂
1 血糖试剂盒。
其中有酶试剂：葡萄糖氧化酶 GOD ﹥13U/m﹥ 2 在505nm比色，以1号空白管调零。
五、结果处理
将测定的A标准、A样品数据代入公式，计算出样品中葡萄糖的浓度。 A样品
C A标准 ×C标准 mg/dL或mmol/L
式中，C为样品中葡萄糖的浓度；A标准为葡萄糖标准液在505nm波长的光吸收值；A样品为待测样品在505nm波长的光吸收值；C标准为葡萄糖标准液中葡萄糖的浓度 100mg/dL 。
实验结果：
C 0.147/0.310×100mg/dL 47.42mg/dL
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