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生物化学 Biochemistry Biological chemistry 主要运用化学的原理和方法，从分子水平来研究生物体（化学组成及化学变化）的一门学科 在分子水平探索生命现象的本质 生命的化学 生化 分子生物学 molecular biology 研究核酸、蛋白质等生物大分子的结构、功能及其调控的一门学科。 生物分子： 由C、H、O、N等组成的有机化合物 如：糖类、脂类、蛋白质、核酸和维生素等。 生物大分子 ： 分子量较大，结构复杂 包括：聚糖类、聚脂类、蛋白质和核酸等 生物信息分子： 结构蕴藏信息 包括：聚糖类、蛋白质和核酸等 生物信息大分子的特点： 质量一般在104~106之间或以上。 由特殊的亚单位（subunit）按一定的顺序、首尾连接形成的多聚物（polymer）。 亚单位在多聚物中的排列是有一定顺序（称为序列，sequence）。序列决定着生物大分子的空间（立体）结构形式和功能，决定着生物大分子的信息内容。 1．组 成 ①基本组成单位 氨基酸 核苷酸 R B H2N-C-COOH P-S H ②组成单位的种类 20种 A G C T DNA A G C U RNA ③连接方式 肽键 3’-5’磷酸二酯键 ④长链骨架 O -N-C-C-N-C-C-N -P-S-P-S-P-S-P-S-P R A G C T ⑤链的侧面 aa的侧链 A G C T U （R基） ⑥链的两端 N-端→C-端 5’-端 → 3’-端 2. 结 构 ⑦一级结构 氨基酸的排列顺序 碱基的排列顺序 ⑧空间结构 二级： α螺旋 双螺旋 β片层、β转角、 无规卷曲 三级： 超螺旋、核小体 四级 ： 3．功 能 生命活动中各种功能的 遗传信息的贮存、传 直接执行者 代、表达 （生命的物质基础） （遗传的物质基础） 4．性 质 紫外吸收 280nm 260nm 变 性 粘度↑ 粘度↓ Tm 复 性 结构要点 DNA双螺旋 蛋白质α-螺旋 1. 链的组成 双链 反向 单链 螺旋方向 右手 右手 2. 骨 架 -P-S-P-S-P-S- -N-C-C-N-C-C- 侧 面 A G T R 3. 稳定因素 氢键 碱基堆积力 氢键 4. 参 数 每圈 10bp 3.6个氨基酸残基 螺 距 3.4nm 0.54nm 直 径 2.0nm 反应 试剂 颜色 反应基团 有此反应的Pr及AA 茚三酮反应 茚三酮 兰紫色 游离氨、羧基 Pro和羟Pro呈黄色 双缩脲反应 NaOH,稀CuSO4 紫或粉 2个以上肽键 所有蛋白质 Folin酚试剂反应 CuSO4磷钨酸-钼酸 兰色 酚基 Tyr Millon反应 Millon,硝酸，亚硝酸 红色 酚基 Tyr 黄色反应 HNO3及NH3 黄、橘黄 苯基 Phe,Tyr 乙醛酸反应 乙醛酸H2SO4 紫红 吲哚 Trp 坂口反应 次氯酸钠,萘酚 红色 胍基 Arg 5.1蛋白质分离和纯化 研究Pr的结构、性质和功能，首先需要得到纯的蛋白质样品。 1. Pr来源：微生物、动物或植物细胞； 2.分离和纯化过程须在温和的条件下进行; 3.随时测定Pr活性并检测Pr含量. 5.2 Pr含量测定法 1. 微量凯氏定氮法： 2. 缩二脲法： 稀CuSO4 ,NaOH; 肽键 3. Lowry’s法：Folin-酚试剂 在碱性条件下磷钼酸、磷钨酸混合试剂与酪氨酸上的酚发生反应，生成蓝色化合物，将其与双缩脲法结合起来，形成两种颜色的混合物，在650nm具有特定的吸收。 * 生物大分子 核酸 蛋白质 聚糖 结构单位 核苷酸 氨基酸 单糖 连接键 3’,5’ -磷酸二酯键 肽键 糖苷键 游离末端 5’磷酸，3’羟基 氨基端，羧基端 非还原端，还原端 多聚体合成方向 5’→3’ N→C 非还原端→还原端 寡聚体数* 6 6 ＞ 1056 n 3 三种生物大分子结构特点 （* 由3个不同的氨基酸、核苷酸和已糖分别通过肽键、磷酸二酯键所组成的寡聚体数目） 蛋白质和核酸的比较 蛋白质和核酸的比较 α-螺旋和?-折叠结构比较 区别点 α-螺旋 ?-折叠 形 状 螺旋状 锯齿状 氢 键 链内，与长轴平行 链间，与长轴垂直 R 基 较大 较小 延伸性 较大 较小 升1AA残基高度 0 .15nm 0.36nm 举 例 毛发角蛋白 蚕丝蛋白 一级结构决定空间结构，但并非唯一因素。 （1）一级结构决定空间结构：同一蛋白质不同状态的比较。 【范例】蛋白变性与复性 （2）一级结构并非唯一决定因素：【范例】分子伴侣 （3）保守序列、保守氨基酸改变，功能改变；保守氨基酸不变，功能不变。