第8周啤酒废酵母酶解制备抽提物的实训-定稿.docVIP

综合实训5 啤酒废酵母酶解制备抽提物的实训 一、实训目的 啤酒废酵母是啤酒生产的重要副产物，其量约占啤酒产量的0.15%。长期以来，多数啤酒企业把啤酒生产中的大量废酵母排入污水管道，造成了严重的环境污染。然而，这些大量废弃的啤酒酵母除含有50%左右的蛋白质、6%-8%的核酸外，还含有丰富的B族维生素、维生素D2,脂肪、多糖、矿物质以及多种经济价值很高的辅酶和生理活性物质，如辅酶A、辅酶Q、辅酶I、细胞色素C,凝血质、谷肌甘肤和麦角多醇等。以啤酒废酵母为原料制备各种酵母抽提物，能为啤酒废酵母的综合利用带来很好的经济效益，是值得深入研究的课题。 啤酒酵母抽提物 又称酵母自溶液，酵母浸出物，酵母味素等 的制备方法主要有自溶法、酶解法、酸碱分解法、高压均质机法等。本实验采用酶解法，进行了制备酵母抽提物的酶解试验，并测定酶解后的氨态氮的含量，分析酶解后的氨态氮与总氮的比值，从而了解酶解法制备酵母抽提物的效果。通过实训培养学生的动手能力，并掌握酵母酶解的基本操作和氨态氮的测定技术。 1、实训前准备工作 （1）仪器设备：超声波破碎仪，PH计 （2）材料试剂： ①新鲜啤酒废酵母； ②风味蛋白酶； ③0.02mol/L、0.1mol/L标准氢氧化钠溶液； ④中性甲醛溶液：在500ml 37％分析纯甲醛溶液中加入10ml 0.5％酚酞乙醇水溶液，用0.02mol/L的氢氧化钠溶液滴定到微红，贮于密闭的玻璃瓶中； ⑤酚酞指示剂： 0.5 克酚酞溶于100 ml50 ％的乙醇溶液中。 2、实训步骤 用电子天平称取20克新鲜啤酒废酵母，置250mL烧杯中，加200mL水，充分搅拌约2分钟，配置成有一定浓度均匀的酵母悬浮液; 然后，用高速离心机对酵母悬浮液进行离心分离，5000rmp ，10分钟，倾倒上清液，再用200 mL水分三次把酵母泥完全洗脱到250mL烧杯中并搅拌均匀，并调节PH值至6.0，吸取25mL混合液，移入具塞试管内，贴标签样1（静置放冰箱，第2天取上清液进行滴定实验）; 把盛有175mL酵母液的250mL烧杯置超声波破碎仪中，进行超声波细胞破碎，设置200W功率，超声时间5s、间隙5s、总工作时间5min。超声处理结束后静置10min，量取50mL液体，吸取25mL混合液，移入具塞试管内，贴标签样2（静置放冰箱，第2天取上清液进行滴定）； 用天平称取0.3克蛋白酶，加入到经超声波细胞破碎的150mL酵母液中，充分搅拌约2分钟后，用三层保鲜膜封好烧杯，然后置55℃的恒温箱中保温酶解约20小时； （注：以上实验步骤周三完成。） 酶解约20小时后，恒温水浴锅中温度调节到85℃加热灭酶活15 min，然后取出冷却到室温，用5000rmp高速离心机进行酵母悬浮液的离心分离10分钟，小心倾倒收集上清液，并记录清液体积mL数，并测量清液酶解后的PH值; 把收集到的上清液全部移入500 mL容量瓶中，并定容500 mL，混匀，贴标签样3; 用移液管分别在静置后的样1、样2及定容混匀的酶解上清液样3中各吸取2 mL，加入到100ml的锥形瓶中，各加入水5 mL，混匀。同时，做空白对照中，在另一100ml的锥形瓶中加入7 mL水。然后，在每个锥形瓶中各加入5滴酚酞指示剂，混匀后各加2 ml甲醛溶液再混匀，用0.02mol/L或0.1mol/L（以实际情况为准）标准氢氧化钠溶液滴定至溶液显微红色。记录每次每瓶消耗的标准氢氧化钠溶液的毫升数V1，V0； 分别计算原样、超声后、酶解后酵母悬液的氨基态氮值; 氨基氮计算公式： 氨基氮（毫克/毫升） （V1－V0）×NNaOH×14.008 公式：V1为滴定待测液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数； V0对为滴定对照液耗用标准氢氧化钠溶液的平均毫升数。 NNaOH为标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度。 3、实训报告 精心操用，细心观察记录实训过程，整理分拆数据，认真撰写实训报告。 4、注意事项 （1）标准氢氧化钠溶液应在使用前标定，并在密闭瓶中保存。不可使用隔日贮在微量滴定管中的剩余氢氧化钠。 （2） 中性甲醛溶液在临用前配制，若已放置一段时间，则使用前需要重新中和。 （3）实操作过程务必精心操作，注意安全。 （4）本次实训分二天完成任务，每一组的样品要贴上标签。