HPLC柱十大误区.docVIP

【资源】HPLC柱十大误区误区一：HPLC柱不可反冲否。通常液相色谱柱的设计的耐压值远高于最大操作压力（大约2倍）。因此，对于稳定的填料床，如果使用合适的流动相和合理的时间分配，填的好柱子能够左右开弓。反过来使用HPLC柱的原因有以下几点：换柱时反冲，清洗柱头强吸附的物质，以及冲洗出残留物质防止压力增大。但是有一个特例，如果厂家在柱头使用了大粒度的填料，反冲会冲出这一部分填料。通常而言，出口处的填料粒度要比整支柱子最小的还要小。比如标称5μm的粒度，实际粒度在3-7μm，则出口处的粒度必须比3μm要小，这才能够保证柱子末端的填料不会被冲出去。那么为什么厂家要在入口和出口处使用不同粒度的填料呢？因为大粒度的不容易堵，比如0.5μm的柱子比起同样2μm的柱子更容易堵塞。因此为了避免压力的快速升高，就要生产出更加有容差，大粒径填料入口的柱子。博主注：柱子能不能反冲从我一开始接触就遇到了，有时候不管能不能，若是进过了脏东西，非要这样做不可，因为不可能让它沿着柱子跑一遍，费时费钱。实际上，能不能反冲直接决定于填料床的模型和实际填料到底有什么“添加剂”在里面，而这些资料waters，agilent，Phenomenex是不会给我们的。经验表明，反冲效果最好的是菲罗门，手上的不论是luna还是Synergi，都能够这样，