复习-育种方法详解.ppt

生物育种 第一步：获取目的基因： GAGACTGATTGGCCTTAAGCTCGAG CTCTGACTAACCGGAATTCGAGCTC 获得的目的基因如何进入受体细胞？ DNA 分子大、难扩散、难以通过细胞膜运输 “特洛伊木马”的启发 “木马”：能比较容易穿过细胞膜进入细胞； 能携带目的基因 有助于目的基因在细胞内的表达 常用的运载体：质粒、噬菌体和动植物病毒 基因工程的基本操作步骤： 目的基因导入受体 植株再生 筛选 移栽入土 基因工程基本步骤 1、人工合成基因 2、从某生物体细胞内的DNA中直接分离基因 3、反转录法等等 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 基因的剪刀——限制性内切酶（简称限制酶） （一）基因操作的工具 限制酶是在生物体(主要是微生物)内的一种酶，能将外来的DNA切断，由于这种切割作用是在DNA分子内部进行的，故名限制性内切酶。 特点：特异性。 即一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并且能在特定的切点上切割DNA分子。 什么叫黏性末端？ 被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 基因的“剪刀”──限制性核酸内切酶（限制酶） 　　一种限制酶只能识别一种特定的核苷酸序列，并在特定的切割点上将DNA分子切断。 专一性（eg：EcoRI限制酶） GAGACTGATTGGCCTTAA CTCTGACTAACCGG GCTCGAG AATTCGAGCTC G CTTAA AATTC G 通常能识别4～6个碱基长度的特定DNA序列，并以特定的模式剪切DNA链 识别位点和切割位点 GGA CCT TCC AGG 黏性末端 平末端 作用位置：脱氧核糖和磷酸之间的缺口 基因的针线——DNA连接酶 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 磷酸二酯键 　　运载体必须同时满足： ①能与目的基因结合，即具有适用于外源DNA片段插入的限制酶切位点； ②能进入受体生物细胞并在受体生物细胞内复制并表达（相对分子质量要小）； ③要有一个或多个选择标记，用于转化细菌的筛选 导入过程需要运输工具——运载体 运载体的作用有哪些？ 质粒： 质粒是染色体外能够进行自主复制的遗传单位，包括真核生物的细胞器和细菌细胞中核区外的DNA分子。现在习惯上用来专指细菌、酵母菌和放线菌等生物中核以外的DNA分子（即使细菌不含质粒，也可以正常生活）。 质粒是基因工程最常用的运载体。 绝大多数细菌质粒都是闭合环状DNA分子。有的一个细菌中有一个，有的一个细菌中有多个。用作运输工具的质粒应选择多拷贝形式，以便于实验操作。 标记基因，便于进行检测。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素的标记基因。 质粒的存在与否对宿主细胞生存没有决定性作用，但复制只能在宿主细胞内成。 （三）基因操作的基本步骤 步骤二：目的基因与运载体重组 1）用一定的限制酶切割质粒，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 　　被同一种限制酶切断的几个DNA是否具有相同的黏性末端？ 基因的针线：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 用同种限制酶切割 目的基因 质粒 基因的针线──DNA连接酶 　　连接酶的作用是：将互补配对的两个黏性末端连接起来，使之成为一个完整的DNA分子。 重播 导入 扩增 （三）基因操作的基本步骤 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 将目的基因导入受体细胞的原理 借鉴细菌或病