副溶血性弧菌检验详解.pptVIP

GB 4789.7-2013副溶血性弧菌检验 一、概述 二、生物学特性 三、检测方法 一、概 述 副溶血性弧菌Vibrio parahaemolyticus于1950年从日本一次暴发性食物中毒中发现。 该菌存在于近海海水、海底沉积物和鱼类、贝壳等海产品中。在37℃、pH7.7、3～4%NaCl环境中生长最好。 概 述 本菌嗜盐畏酸怕冷，在无盐环境不能生长，3%～6%盐水繁殖迅速，低于0.5%或高于10%盐水中停止生长。对酸敏感，在2%醋酸或50%食醋中1 min即死亡。不耐热，56℃5 min可杀死，90℃1 min灭活。对高盐浓度抵抗力甚强。5℃以下容易死亡。 分类：属弧菌科(Vibrio)，弧菌属。 分布：主要存在于近海岸的海水、海底沉积物和鱼类、虾类、贝类、牡蛎等海产品中。 人多因食用被本菌污染而又未煮熟的海产品和其他食品而引起中毒。 流行病学 季节分布：8-9月为高峰期 中毒食品：主要为海产品、其次为水产制品、淹制品、咸菜及污染食品 地区分布：沿海地区居多 临床症状：主要有腹痛、腹泻、恶心、呕吐、发热 潜伏期：10小时左右 致病作用 主要引起胃肠炎，最常见的是食物中毒和感染性腹泻。由于病菌在食品中大量繁殖，侵入肠道后继续繁殖并释放出大量肠毒素，引起剧烈的胃肠炎。 二、生物学特性 ---菌体形态及染色特征 革兰氏阴性杆菌，无芽孢 0.3~0.7×2~6 μm 两端浓染 呈多形态（棒状、弧状、球状、卵圆形等）排列不规则 液体培养基生长单鞭毛，固体培养基常有周生鞭毛（侧毛） 二、生物学特性 ---培养特性 需氧兼性厌氧 在含 NaCl 3-4%的培养基中生长良好 无盐和NaCl 10%的培养基中均不生长 最适培养温度为：30--37℃ 最适pH范围：pH7.4-pH8.2 在固体培养基上，菌落通常隆起，圆形半透明，表面光滑、湿润、一般不产生色素。 在血平板和嗜盐性平板上，菌落生长良好。 肉汤、琼脂、生化管都应含有3-4%的NaCl含量。 神奈川现象(Kanagawa phenomenon，KP) --在特定条件下，某些菌株在含高盐(7％)的人O型血球或兔血球及以D甘露醇作为碳源的我妻琼脂平板上产生β溶血的现象 神奈川现象与本菌的 致病性密切相关 血清分型 O抗原（耐热的菌体抗原） O1- O13 共13种 K抗原型（荚膜抗原） K1- K71 共65种 H抗原（鞭毛抗原），无特异性 三、检测程序 GB 4789.7-2013 1、样品制备 食品样品 鱼类：表面组织、肠、鳃 贝类：全部内容物（贝肉和体液） 甲壳类：动物的中心部分，包括肠、鳃 水产制品 如为带壳贝类或甲壳类，应先在自来水中洗刷外壳并甩干表面水分，然后以无菌操作打开外壳，按上述要求取相应部分。 2、增菌-- 3%氯化钠碱性蛋白胨水 定性--取样品 25 g（mL），加入3%氯化钠碱性蛋白胨水 225 mL。 定量--选择3个适宜的连续稀释度，每个稀释度接种3支含有9 mL 3％氯化钠碱性蛋白胨水的试管，每管接种1 mL。置36℃±1 ℃恒温箱内，培养8 h～18 h。 3、分离—TCBS平板、弧菌显色平板 对所有显示生长的增菌液，用接种环在距离液面以下 1 cm内沾取一环增菌液，于TCBS平板或弧菌显色培养基平板上划线分离。一支试管划线一块平板。于36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。 TCBS平板上典型特征 TCBS平板上典型特征 4、纯培养 挑取3个或以上的可疑菌落，划线3％氯化钠胰蛋白胨大豆琼脂平板，36℃±1 ℃培养18 h～24h。 5、初步鉴定 氧化酶试验 涂片镜检 3%氯化钠三糖铁 嗜盐性试验 底层变黄不变黑，无气泡，斜面颜色不变，有动力 6、确定鉴定 甘露醇发酵试验--含3%氯化钠的培养基 赖氨酸脱羧酶试验 V-P试验 ONPG 试验—采用3%氯化钠三糖铁琼脂隔夜培养物进行 副溶血性弧菌： 甘露醇 + 赖氨酸脱羧酶+ V-P - ONPG - ONPG 试验 挑取1满环新鲜培养物接种于0.25 mL 3%氯化钠溶液，在通风橱中，滴加1滴甲苯，摇匀后置37 ℃水浴5 min。加0.25 mL ONPG溶液，36 ℃培养观察24 h。 阳性结果呈黄色。阴性结果则24 h不变色。 可选择生化鉴定试剂盒或全自动微生物生化鉴定系统。 API 20E 7、选做试验 血清学分型--11种O抗原血清 神奈川试验--我妻氏血琼脂平板 8、结