汉坦病毒基因研究可行性报告讲解.docVIP

科技计划项目 鼠类携带汉坦病毒的 基因特征及溯源研究 可 行 性 报 告 二O一四年十二月 目 录 一、立项的背景和意义 二、国内研究现状和发展趋势 三、研究内容和技术关键 四、研究的目标 五、研究方案、技术路线、组织方式与课题分解 六、计划进度安排 七、现有工作基础和条件 八、经费概算 科技计划项目可行性报告 鼠类携带汉坦病毒的基因特征及溯源研究 一、立项的背景和意义 肾综合征出血热 (HFRS)是由汉坦病毒引起的经鼠传播的自然疫源性传染病。全球每年约有10万例HFRS发生，病死率约为2%～10%，中国是受HFRS危害最严重的国家，占世界报道病例总数的90%以上。浙江省自1963年发现首例HFRS病例以来,70-80年代发病人数不断上升,90年代以后疫情逐步下降。但部分县市的发病率还是居高不下。丽水地区仍为浙江省HFRS疫区。有文献显示丽水地区宿主动物带毒率高达5.14%,远高于浙江省平均带毒率2.9%。这也为HFRS在该区发流行埋下隐患，所以做好局部防控就显得更为必要。汉坦病毒属于布尼亚病毒科汉坦病毒属，目前，按病毒抗原反应性和基因结构的不同，已发现40多种血清型或基因型。每一型别均来自一种或少数几种密切相关的啮齿动物，由于不同型别的汉坦病毒有着不同的原始宿主,其防制措施及对人类的致病性也各有不同,因此,搞清当地流行的汉坦病毒基因型别，是为进一步研究本地汉坦病毒的分子流行病学情况提供科学依据，对指导本地肾综合征出血热的防控工作具有十分重要的现实意义。 二、国内研究现状和发展趋势 通过中国知网和万方医学网数据库查阅0余篇文献。现就文献如下：国内现状(98.8%)，具有小范围的地理聚集现象。 魏亚梅等［2］收集2012年河北省部分地区捕获的鼠类标本，经段扩增并测序，与该地区以往序列及其他部分标准株进行系统发生树及同源性分析。164份鼠肺标本，经IFA检测26份阳性，挑选９份有代表意义的标本进行逆转录巢式PCR扩增并测序，结果均为汉城型S3亚型，病毒间变异不大，同源性达95.2％～100.0％。以与往测序株比较同源性为99.0％～100.0％。同型病毒基因相对保守，具有区域稳定性特征。 王俊等［3］为了解安徽省汉坦病毒型别及分子特征，将汉坦病毒抗原阳性的鼠肺及急性期病人血清标本接种Vero细胞，分离汉坦病毒。阳性培养物提取病毒总 RNA，应用RT－PCR 扩增病毒S片段，产物经测序拼接获得S片段全基因序列，构建基因序列系统进化树，确定病毒型别。结果3 株病毒中两株为汉滩型，一株为汉城型，序列相似性达 98.4% 以上，未发生较大变异。 刘大鹏等［4］采用间接免疫荧光方法，检测大连地区2012年采集的188份鼠肺，检出汉坦病毒抗原阳性６份。再用特异性引物扩增阳性标本中Ｍ基因片段，测序后进行生物信息学分析，构建系统进化树。结果表明６份样品病毒均为汉城型病毒S3亚型，但不处于同一细小进化分支。其中一支与北京BJHD01和CP27C株SD227和SD10株处于同一省现状1例在境外输入褐家鼠中分离的汉坦病毒DX1101株进行测序并构建系统发生树进行分型与系统发生分析，显示与英国分离株IR461基因距离最为接近。对输入性汉坦病毒的防控有重要意义。 综合国内文献， 参考文献： ［1］耿英芝，田疆，刘芸，等.辽宁省汉城型汉坦病毒基因亚型分析［J］.中国公共卫生，2012，28 （12）：1594-1596. ［2］魏亚梅，韩旭，韩占英，等.河北省肾综合征出血热主要流行区鼠携带汉坦病毒基因序列分析［J］.中国病毒病杂志，2013，3（6）：435-438. ［3］王俊，孙永，胡兴强.安徽省汉坦病毒的基因序列分析［J］.安徽预防医学杂志，2013 ， 19（2 ）：71-73. ［4］刘大鹏，万强，曲荣伟，等.2012年大连地区鼠携带汉坦病毒状况及基因特征分析［J］.预防医学论坛，2013，19（12）：893-895. ［5］姚苹苹,雷永良,徐　芳等.2007年浙江丽水地区汉坦病毒的分离与型别鉴定［J］. 中国人兽共患病学报,2009,25(2):100-106. ［6］徐芳，朱函坪，姚苹苹,等.浙江省2008－2011年啮齿动物中汉坦病毒的分离及鉴定［J］.中国媒介生物学及控制杂志，2013，24（4）：285-288. ［7］ 胡群，郑剑宁，马思杰，等.一例输入性鼠类携带汉坦病毒的分子遗传学分析［J］.中国媒介生物学及控制杂志，2013，24（1）：24-27. 三、研究内容和技术关键 (一)研究内容 1、对所采集到的鼠肺标本进行汉坦病毒核酸检测，阳性标本进行全基因序列测定。再使用相关软件进行多序列比对，序列差异性及相似度分析；构建系统进化树并进行进化分析。通过检测分析，研究鼠类携带汉坦