动物细胞培养和核移植技术上课详解.ppt

动物细胞工程常用的技术： 动物细胞培养 动物细胞核移植 动物细胞融合 单克隆抗体 等 一、动物细胞培养 学习活动一： 合作学习（结合问题思考流程） 有关概念： 原代培养：从机体取出后立即培养的细胞为原代细胞。一般培养的第1代细胞与第10代以内的细胞称为原代细胞培养。 传代培养：将原代细胞（10代以后）从培养瓶中取出，配制成细胞悬浮液，分装到两个或两个以上的培养瓶中继续培养，称为传代培养。 问题探讨： 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） O2作用：进行 有氧 呼吸，提供能量 CO2作用：维持培养液的PH值 4、动物细胞培养技术的应用 根据动物细胞核仍具有全能性的特点,怎样将动物细胞的全能性表达? 二、动物体细胞核移植技术 1、概念：将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称克隆动物 2、核移植的种类 胚胎细胞核移植 体细胞核移植 学习活动四：思考探究 1997年，美国威斯康星州的一个奶牛场有一头名叫卢辛达的奶牛，年产奶量为30.8t，创造了世界奶牛产奶量的最高记录。目前世界各国高产牛奶场的奶牛，平均每年产量为十几吨，而我国平均水平仅有3－4吨。 你能想办法繁殖卢辛达的后代，使年产奶量为30.8t吗？ 4、应用前景： 5、存在问题： ① 成功率低 ② 克隆动物存在健康问题 ③ 克隆动物食品的安全性问题存有争议 问题 思考题 思考题 思考题 （MⅡ卵母细胞） 减数第二次分裂中期 去核的卵母细胞 供体细胞注入去核卵母细胞 激活受体细胞，完成分裂、发育 胚胎移植 代孕牛子宫 克隆牛 3、过程： 供体细胞（供核） 细胞培养 体细胞 卵巢卵母细胞（MⅡ中期：供质） 去核 无核卵母细胞 注入 细胞融合 重组细胞 构建重组胚胎 胚胎移植 代孕母体 生出与供体奶牛遗传基础相同的犊牛 归纳: 1.共分成两大阶段：核移植和胚胎移植 2.取卵细胞作受体细胞的原因是:它是最大的细胞,易操作,它发育可直接表达性状 3.严格来说新个体有卵巢母细胞的细胞质所以有两个亲本的性状 受体细胞为减数分裂第二次分裂中期（MⅡ）的卵母细胞。 重组细胞需通过物理或化学方法激活，从而完成细胞分裂和发育进程。 体细胞核移植的技术操作过程主要包括核供体细胞和核受体细胞的处理和制备、核移植、构建重组胚胎、胚胎移植等步骤。 卵细胞 Ａ母绵羊 Ｂ母绵羊 乳腺细胞 细胞质 细胞核 细胞核移植 早期胚胎 卵裂 C母绵羊子宫 胚胎移植 多莉羊 分娩 妊娠 多莉羊的培育过程 融合后的卵细胞 ① 加速家畜遗传改良进程，促进优良畜群繁育 ② 保护濒危物种，增加存活数量 ③ 克隆动物作为生物反应器，生产医用蛋白 ④ 可以作为异种移植的供体 ⑤ 可以用于组织器官的移植 从母羊甲的体细胞中取出细胞核，注入到母羊乙的去核卵母细胞中，融合后的细胞经卵裂形成早期胚胎，再将胚胎移到另一只母羊丙的子宫内，出生的小羊大多数性状 A. 难以预测 B. 像甲 C. 像乙 D. 像丙 练一练~~~ 2 .下列有关克隆的叙述，不正确的是 A.生物体通过体细胞进行的无性繁殖 B.将某种瘤细胞体外培养繁殖成大量细胞 C.扦插和嫁接实质上也是克隆? D.将鸡的某个DNA片段整合到小鼠的DNA中 练一练~~~ 1、植物组织培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ ２、动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的吗？ ３、为何动物细胞培养过程将组织分散成单个细胞的呢？ ４、如何将动物组织分散成单个的细胞呢？ ５、胰蛋白酶的作用是什么呢？由此可说明细胞间的物质是什么成份？ 没有 是 成块的组织细胞靠在一起,彼此限制了细胞的生长和增殖 先用剪刀剪碎,后用蛋白酶处理 胰蛋白酶水解蛋白质 细胞间的成份是蛋白质(胶原蛋白等) ６、细胞膜的主要成份是什么？ ７、胰蛋白酶能将细胞消化掉吗？ ８、既然胰蛋白酶能将细胞消化掉，那将动物组织分散成单个细胞要注意什么问题呢？ ９、能够用胃蛋白酶代替胰蛋白酶吗？为什么？ 10、动物细胞培养取材时，一般是取胚胎组织或幼龄动物的组织或器官，请解释原因？ 蛋白质和磷脂 能 注意时间的控制 不能，因为两者的最适PH不同，而正常组织细胞的生