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TDZ对微型月季不定芽生长的影响 　　摘要：以微型月季（Rosa chinensis minima）单芽茎段为外植体，考察不同浓度噻重氮苯基脲（TDZ）对不定芽生长的影响。结果表明，低浓度的TDZ可以促进月季不定芽的生长，但TDZ浓度过高会导致月季不定芽呈现矮化现象，节间缩短，培养基中添加0.6 mg/L TDZ时月季不定芽的高度最大。 　　关键词：微型月季（Rosa chinensis minima）；噻重氮苯基脲（TDZ）；不定芽 　　中图分类号：S685.12；S339.4+1 文献标识码：A 文章编号：0439-8114（2013）13-3178-02 　　微型月季（Rosa chinensis minima）系蔷薇科蔷薇属常绿灌木。其植株小巧玲珑，花期不断，是一种流行的微型花卉种质资源[1]。随着其市场需求的不断扩大，对其组织培养技术进行研究和改进已成为热点[2]。噻重氮苯基脲（Thidiazuron，TDZ）是苯基脲衍生物的一种，作为一种有效的生长调节剂被应用于多种植物的细胞和组织培养中[3，4]。许多研究表明TDZ可以诱导腋芽萌发[5]及愈伤组织形成[6]、直接诱导叶片不定芽的形成[7]、延迟叶片黄化[8]及鲜花凋亡[9]、延缓马铃薯早疫病[10]、提高遗传转化效率[11]。本研究采用含不同浓度TDZ的培养基诱导微型月季不定芽，探究在微型月季不定芽生长过程中TDZ浓度对其不定芽高度和节间长度的影响，为微型月季组织培养技术的优化提供参考。 　　1 材料与方法 　　1.1 植物材料 　　吉林师范大学植物分子生物学实验室培育的微型月季盆栽，株高约35 cm，花色粉红。 　　1.2 外植体消毒 　　剪取微型月季当年生健壮枝条，以软毛刷清除其表面灰尘，置于盛有清水的烧杯中，加少量洗洁精浸泡10 min，期间不断摇动烧杯，流水冲洗1 h，Cl2灭菌（1 mL浓HCl与25 mL NaClO反应生成）20 min。超净工作台中无菌蒸馏水浸泡清洗3次，无菌滤纸吸干。 　　1.3 不定芽的诱导 　　剪取长1.5 cm左右的单芽茎段，形态学下端接种于诱导培养基中，诱导培养基以MS为基本培养基，含蔗糖30 g/L、琼脂7 g/L，pH 5.83～5.85，121 ℃高压灭菌20 min。添加不同浓度的TDZ、6-BA和NAA，培养基中具体激素浓度组合见表1。每处理均设3次重复，接种后培养条件为25 ℃、光照度2 000 lx、光照时间16 h/d，30 d后观察不定芽的诱导情况，测量不定芽高度及节间长度，利用SAS 8.0软件进行统计分析。 　　1.4 生根培养 　　将生长状况良好的不定芽转入生根培养基（MS+0.3 g/L活性炭）中，30 d后观察并统计生根率。 　　2 结果与分析 　　2.1 激素浓度组合对微型月季不定芽诱导的影响 　　微型月季单芽茎段接种于诱导培养基30 d后，7种培养基中均诱导出不定芽，但不定芽高度及节间长度均存在明显差异（表1，图1）。由表1和图1可以看出，培养基中TDZ浓度由0.2 mg/L升高到0.6 mg/L，不定芽高度和节间长度均有所增加，而TDZ浓度由0.6 mg/L升高到2.0 mg/L，不定芽高度和节间长度又逐渐下降，出现矮化现象。各处理中培养基2（0.6 mg/L TDZ）的不定芽高度最大（图1B），1.0 mg/L TDZ与0.1 mg/L NAA配合施用（培养基6）可以有效缓解TDZ浓度过高引起的矮化现象（图1E），而2.0 mg/L 6-BA单独施用时（图1F）不定芽高度和节间长度与培养基2（0.6 mg/L TDZ）及培养基6（1.0 mg/L TDZ+0.1 mg/L NAA）没有显著差异（P0.05）。 　　2.2 生根培养 　　微型月季不定芽转入生根培养基30 d后试管苗生根率为90.48%。 　　3 小结与讨论 　　在微型月季茎段离体再生体系中，较低浓度的TDZ可促进不定芽长高，但TDZ浓度过高会导致不定芽节间明显缩短，出现矮化现象，这与Debnath对越橘的研究结果类似[12]。在1.0 mg/L TDZ的基础上添加0.1 mg/L NAA也能起到促进节间伸长的效果，说明TDZ与NAA在微型月季不定芽生长的过程中可能起拮抗作用。不定芽在含2.0 mg/L 6-BA的培养基中生长状况也较好，不定芽高度和节间长度与含0.6 mg/L TDZ的培养基中相似，但不定芽长势较差，可见TDZ对不定芽生长的促进效果优于6-BA。这与之前的研究结果一致[13-16]，可见TDZ具有更强的细胞分裂活性。 　　参考文献： 　　[1] 余树勋.月季[M].北京：金盾出版社，2008. 　　[2] 刘 慧.微型月季茎段组培快繁技术研究[J].北方