第3章原核生物转录及调控讲解.pptVIP

第3章 原核生物转录及其调控 原核生物转录和翻译是偶联的，其mRNA为编码多种蛋白的多顺反子。原核生物σ 因子协助RNA聚合酶识别启动子基本元件并由此起始转录 ，并在具有发卡结构的终止子处（或在ρ因子协助下）结束转录。 σ 因子是基因选择性转录的调控因子。启动子上游具有能结合转录激活因子如CRP（CAP）的调控元件从而大幅度地提高转录效率。 操纵子是原核生物调控的主要模式，其中最典型的代表为乳糖操纵子和色氨酸操纵子。除了调控蛋白与操纵元件结合阻止RNA聚合酶前进达到降低转录效率主要调控途径外，还存在一种称之为“弱化子”特殊调控模式。弱化子通过前导肽的翻译过程中核糖体占位是否影响前导mRNA的终止子形成而控制后续mRNA分子合成。 转录单位 启动子（Promoter） 终止子 终止序列的特点： 1）发夹结构(减速) 2）4个或更多的U残基 （脱离） RNA polymerases have four types of subunit; α, β, and β` have rather constant sizes in different bacterial species, but σ varies more widely. 大肠杆菌RNA聚合酶的组成 利福平（Rif）紧密与β亚基结合抑制起始。 多阴离子肝素可竞争性与β`竞争性结合， 从而抑制转录。 五、转录的开始 1.启动子结合（闭合启动子复合物的形成） 闭合启动子复合物：RNA聚合酶与DNA组成的复合物，一般在DNA的-35序列处，不能起始RNA合成。 2.DNA解旋（开放启动子复合物的形成) 开放启动子复合物：启动子与RNA聚合酶在-10序列处形成的复合物，在这里有更多的碱基被打开并能进行RNA的起始合成。 3.RNA链起始 起始位点为第一个嘌呤残基，其中G比A更常见。当加入第一个碱基后，形成了起始三元复合物（全酶-DNA-第一个核苷酸）；加入第二个碱基后，形成第一个磷酸二酯键，直至加入九个碱基。 起始成功后，聚合酶释放出σ因子，形成核心酶-DNA-新生RNA链三元（三聚）复合物。随着转录泡的移动，不断地解螺旋和再螺旋（解螺旋区域的大小稳定地保持在17bp），RNA链不断的延长。 RNA链的终止和新合成RNA的释放 当RNA聚合酶转录到终止序列（终止信号）时转录终止。 终止序列的特点： 1）发夹结构； 2）富含G-C； 3）4个或更多的U残基 依赖ρ的转录终止 依赖ρ的转录终止 不形成强的发夹结构，必须一种辅助因子即ρ蛋白来帮助转录终止。六聚体蛋白，识别72bp 序列（特异结构），依赖单链RNA水解ATP。 第二节 原核基因转录水平的顺式调节——大肠杆菌σ70启动子) 一、启动子 1.启动子(promoter)的大小 1）核心启动子区域（起始位点、－1O序 列和-35序列) 2）上游元件（CAP位点） 二、RNA聚合酶的覆盖范围及检测法DNA 酶保护法（DNase protection method）。 （一）操纵子与乳糖操纵子 1.提出：1961年, Jacob （雅格布）-Monod（莫诺）. 2.操纵子：操纵子是基因表达和调控的单元，典型的操纵子包括：结构基因、调控元件和调节基因。 3.乳糖操纵子的结构和功能： 大肠杆菌一般利用葡萄糖作为碳源,如果用乳糖做碳源,需要β-半乳糖苷酶,这个酶只有当乳糖成为唯一的碳源时才会被合成。这个酶的合成是由乳糖操纵子调控的. 3.乳糖操纵子结构和功能 乳糖阻抑物 当葡萄糖缺乏时,大肠杆菌内的cAMP的水平上升,CAP结合到cAMP上. CAP –cAMP复合物可结合到紧邻RNA聚合酶结合位点上游的乳糖操纵子的启动子Plac上.CAP的结合引起DNA链发生90℃的弯曲,增强了RNA与启动子的结合,使转录效率提高50倍. （三）弱化子 弱化子:一段可以导致转录效率降低的mRNA序列,该位点称为弱化子. 特点:含有典型的终止子的特点. 1）茎环结构; 2） GC丰富的反向重复序列; 3）4个以上的U. 色氨酸弱化子的mRNA的终止区 弱化作用导致的调节 * * 基因表达调控的主要方式 Figure 8.2 编码链/ +链 模板链/ -链 转录：DNA-RNA 起始-延伸-终止 37度 40 nt/sec ··· ··· TTGACA ···16-18 bp ··· TATAAT ···5-8 bp··· C T -35序列